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篇（1）

[中圖分類號(hào)]G64[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1005-6432（2014）43-0163-02

1加強(qiáng)頂崗實(shí)習(xí)權(quán)益保護(hù)的意義

根據(jù)國(guó)務(wù)院《關(guān)于大力發(fā)展職業(yè)教育的決定》和教育部《關(guān)于全面提高高等職業(yè)教育教學(xué)質(zhì)量的若干意見》的精神，要大力推行工學(xué)結(jié)合，突出實(shí)踐能力培養(yǎng)，通過工學(xué)交替、頂崗實(shí)習(xí)、訂單培養(yǎng)等人才培養(yǎng)模式來(lái)實(shí)現(xiàn)教學(xué)過程的實(shí)踐性、開放性和職業(yè)性。因此，頂崗實(shí)習(xí)是行業(yè)、企業(yè)、學(xué)校優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)和資源共享的客觀要求，是實(shí)現(xiàn)教學(xué)過程與生產(chǎn)過程對(duì)接的需要。

頂崗實(shí)習(xí)是《國(guó)務(wù)院關(guān)于大力發(fā)展職業(yè)教育的決定》中的“2+1”教育模式，即學(xué)生在校學(xué)習(xí)時(shí)間為2年左右，最后1年在實(shí)習(xí)指導(dǎo)教師或企業(yè)師傅的具體指導(dǎo)和組織下，學(xué)生以技術(shù)、生產(chǎn)、服務(wù)或管理人員身份在特定的工作崗位上帶薪生產(chǎn)。其包含兩層含義：頂崗，即履行崗位的任務(wù)與職責(zé)，其勞動(dòng)付出等同于企業(yè)工作者；實(shí)習(xí)，是指學(xué)生在實(shí)習(xí)單位通過實(shí)踐學(xué)習(xí)專業(yè)技能。因此，頂崗實(shí)習(xí)的學(xué)生具有“學(xué)生”與“勞動(dòng)者”雙重身份。在實(shí)習(xí)工作中，他們承擔(dān)了企業(yè)員工的任務(wù)與職責(zé)，但由于學(xué)生這層身份，并不受《勞動(dòng)法》保護(hù)，而目前國(guó)家也沒有專門的法律法規(guī)來(lái)保障高職院校學(xué)生實(shí)習(xí)期間的合法權(quán)益，更沒有具體涉及學(xué)生在企業(yè)實(shí)習(xí)活動(dòng)中的勞動(dòng)保護(hù)、事故處理等問題的對(duì)策。高職院校學(xué)生頂崗實(shí)習(xí)權(quán)益能否得到有效保護(hù)，事關(guān)家庭、社會(huì)的和諧穩(wěn)定，事關(guān)學(xué)校的持續(xù)健康發(fā)展。

2頂崗實(shí)習(xí)期間權(quán)益風(fēng)險(xiǎn)分析

21在危險(xiǎn)環(huán)境中工作，生命安全受到威脅

頂崗實(shí)習(xí)學(xué)生雖是代替企業(yè)職工進(jìn)行作業(yè)，但并不受《勞動(dòng)法》保護(hù)。如果企業(yè)與學(xué)生均安全意識(shí)不強(qiáng)，且實(shí)習(xí)企業(yè)中確實(shí)存在容易造成安全危險(xiǎn)的生產(chǎn)環(huán)境和設(shè)備，則進(jìn)行頂崗實(shí)習(xí)的學(xué)生就很容易面臨各種安全事故的威脅，而且缺乏法律保障，將面臨無(wú)法依法獲得救濟(jì)的風(fēng)險(xiǎn)。

因此，為了保障實(shí)習(xí)學(xué)生的安全，維護(hù)學(xué)生頂崗權(quán)益，2007年教育部與財(cái)政部聯(lián)合頒布了職教成4號(hào)文件《中等職業(yè)學(xué)校學(xué)生實(shí)習(xí)管理辦法》，首次對(duì)實(shí)習(xí)學(xué)生提出“五個(gè)不準(zhǔn)”：不準(zhǔn)安排一年級(jí)學(xué)生到企業(yè)等單位頂崗實(shí)習(xí)；不準(zhǔn)安排學(xué)生從事高空、井下、放射性、高毒、易燃易爆、國(guó)家規(guī)定的第四級(jí)體力勞動(dòng)強(qiáng)度以及其他具有安全隱患的實(shí)習(xí)勞動(dòng)；不準(zhǔn)安排學(xué)生到酒吧、夜總會(huì)、歌廳、洗浴中心等營(yíng)業(yè)性?shī)蕵穲?chǎng)所實(shí)習(xí)；不準(zhǔn)安排學(xué)生每天頂崗實(shí)習(xí)超過8小時(shí)；不準(zhǔn)通過中介機(jī)構(gòu)組織、安排和管理實(shí)習(xí)工作。

22企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)激烈，休息時(shí)間被剝奪

隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)日趨激烈，企業(yè)為了生存發(fā)展，不得不使出渾身解數(shù)爭(zhēng)奪市場(chǎng)，搶占商機(jī)。為了滿足市場(chǎng)需求，各崗位工作量增加，導(dǎo)致企業(yè)隨意安排加班勞動(dòng)。《勞動(dòng)法》規(guī)定一般加班時(shí)間每日不得超過1小時(shí)，特殊原因情況下每日不得超過3小時(shí)，且每月不得超過36小時(shí)?！吨械嚷殬I(yè)學(xué)校學(xué)生實(shí)習(xí)管理辦法》第五條明確規(guī)定，“不準(zhǔn)安排學(xué)生每天頂崗實(shí)習(xí)超過8小時(shí)”。

23受學(xué)生身份限制，未能獲得相應(yīng)的勞動(dòng)報(bào)酬

由于頂崗實(shí)習(xí)學(xué)生未能與企業(yè)簽訂就業(yè)合同，未明確勞動(dòng)報(bào)酬，某些企業(yè)視學(xué)生為廉價(jià)勞動(dòng)力，與其他勞動(dòng)者不能同工同酬，甚至基本月收入遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于當(dāng)?shù)刈畹蜕畋Ｕ瞎べY等現(xiàn)象都在一定程度存在?！堵殬I(yè)教育法》規(guī)定，“企業(yè)、事業(yè)組織應(yīng)當(dāng)給予上崗實(shí)習(xí)學(xué)生適當(dāng)?shù)膭趧?dòng)報(bào)酬”；《中等職業(yè)學(xué)校學(xué)生實(shí)習(xí)管理辦法》第八條規(guī)定，“實(shí)習(xí)單位應(yīng)向?qū)嵙?xí)學(xué)生支付合理的實(shí)習(xí)報(bào)酬。學(xué)校和實(shí)習(xí)單位不得扣發(fā)或拖欠學(xué)生的實(shí)習(xí)報(bào)酬。”

24未能享受等同于企業(yè)員工的勞動(dòng)保護(hù)及工傷保險(xiǎn)權(quán)

由于頂崗實(shí)習(xí)學(xué)生的雙重身份，仍為在校學(xué)生，不能簽署就業(yè)合同，不受《勞動(dòng)法》保護(hù)，某些企業(yè)在學(xué)生發(fā)生工傷后拒絕賠償?！吨械嚷殬I(yè)學(xué)校學(xué)生實(shí)習(xí)管理辦法》第十二條規(guī)定“要為實(shí)習(xí)學(xué)生購(gòu)買意外傷害保險(xiǎn)等相關(guān)保險(xiǎn)，具體事宜由學(xué)校和實(shí)習(xí)單位協(xié)商辦理。實(shí)習(xí)期間學(xué)生人身傷害事故的賠償，依據(jù)《學(xué)生傷害事故處理辦法》和有關(guān)法律法規(guī)處理?！?/p>

3頂崗實(shí)習(xí)期間權(quán)益受侵害的原因

31缺乏專門的頂崗實(shí)習(xí)權(quán)益保障的法律制度，學(xué)生無(wú)法可依目前我國(guó)沒有一部專門針對(duì)高職學(xué)生在頂崗實(shí)習(xí)期間權(quán)益保障方面的法律法規(guī)。我國(guó)《教育法》、《勞動(dòng)法》、《勞動(dòng)合同法》、《高等教育法》均沒有規(guī)定任何頂崗實(shí)習(xí)內(nèi)容。唯一一部涉及頂崗實(shí)習(xí)的國(guó)家法律《職業(yè)教育法》僅提到“國(guó)務(wù)院有關(guān)部門、縣級(jí)以上地方各級(jí)人民政府以及舉辦職業(yè)學(xué)校、職業(yè)培訓(xùn)機(jī)構(gòu)的組織、公民個(gè)人，應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)職業(yè)教育生產(chǎn)實(shí)習(xí)基地的建設(shè)，企業(yè)、事業(yè)組織應(yīng)當(dāng)接納職業(yè)學(xué)校和職業(yè)培訓(xùn)機(jī)構(gòu)的學(xué)生和教師實(shí)習(xí)；對(duì)上崗實(shí)習(xí)的，應(yīng)當(dāng)給予適當(dāng)?shù)膭趧?dòng)報(bào)酬”，內(nèi)容簡(jiǎn)略，操作性不強(qiáng)。

32企業(yè)、學(xué)校、學(xué)生簽署的實(shí)習(xí)協(xié)議中，職責(zé)不明

在生產(chǎn)實(shí)習(xí)中，未明確劃分企業(yè)、學(xué)校、學(xué)生應(yīng)盡的權(quán)利、義務(wù)與責(zé)任。由于頂崗實(shí)習(xí)學(xué)生的雙重身份，決定了在實(shí)習(xí)過程中應(yīng)由學(xué)校、企業(yè)雙方共同管理。如若學(xué)校和企業(yè)雙方對(duì)權(quán)利與義務(wù)不明確，雙方管理重合，會(huì)造成管理主體混亂；雙方考慮若有空缺、漏項(xiàng)，則可能帶來(lái)實(shí)習(xí)工作中的安全隱患。

33學(xué)生缺乏法律意識(shí)，自我維權(quán)意識(shí)不強(qiáng)

某調(diào)研機(jī)構(gòu)針對(duì)高職院校學(xué)生頂崗實(shí)習(xí)權(quán)益保護(hù)等問題展開問卷調(diào)查，調(diào)查發(fā)現(xiàn)有半數(shù)以上的學(xué)生對(duì)法律賦予自己的權(quán)益知之甚少，僅有8%的學(xué)生知道《勞動(dòng)法》規(guī)定每周勞動(dòng)時(shí)間為40小時(shí)；有363%的學(xué)生會(huì)在自己的合法權(quán)益受到侵害時(shí)選擇“離開”或“忍讓”，他們認(rèn)為維權(quán)的成本過高，不值得。有821%的學(xué)生每天工作時(shí)間超過8小時(shí)，476%的學(xué)生一個(gè)月中沒有休息日，其中沒有按規(guī)定支付工資的占總?cè)藬?shù)的395%。

4高職學(xué)生頂崗實(shí)習(xí)期間權(quán)益保護(hù)方法

41盡快建立專門的頂崗實(shí)習(xí)權(quán)益保障的法律制度

無(wú)法可依是目前高職院校學(xué)生頂崗實(shí)習(xí)期間維護(hù)自身權(quán)益的最大障礙。要建立專門的法律，通過國(guó)家強(qiáng)制性手段來(lái)規(guī)定企業(yè)與學(xué)校的責(zé)任，以保障頂崗實(shí)習(xí)學(xué)生的人身權(quán)、休息權(quán)、報(bào)酬權(quán)、勞動(dòng)保護(hù)權(quán)、工傷保險(xiǎn)權(quán)等合法權(quán)益不受侵害。

42學(xué)校方提前對(duì)實(shí)習(xí)企業(yè)進(jìn)行危險(xiǎn)源評(píng)估

在學(xué)生實(shí)習(xí)前，學(xué)校應(yīng)提前去企業(yè)考察，對(duì)企業(yè)中較為危險(xiǎn)的環(huán)境與設(shè)備進(jìn)行危險(xiǎn)評(píng)估，與企業(yè)協(xié)商將危險(xiǎn)隱患盡量降低以達(dá)到可接受程度并拿出應(yīng)對(duì)策略，或放棄該實(shí)習(xí)工作。

43與企業(yè)簽訂詳細(xì)的實(shí)習(xí)協(xié)議，明確各方的權(quán)利、義務(wù)和責(zé)任目前，由于我國(guó)法律對(duì)頂崗實(shí)習(xí)權(quán)益保護(hù)的缺失，通過簽署學(xué)校、企業(yè)、學(xué)生三方協(xié)議，來(lái)規(guī)范各方的權(quán)利、義務(wù)與責(zé)任。一旦發(fā)生勞務(wù)糾紛或工傷、安全等問題，可根據(jù)協(xié)議劃分責(zé)任，采取民事訴訟來(lái)保護(hù)自己的相關(guān)權(quán)益。

44加強(qiáng)法制宣傳，提高學(xué)生的維權(quán)意識(shí)

法律知識(shí)貧乏是維權(quán)意識(shí)淡薄的主要因素。學(xué)校需加強(qiáng)法制教育，開展法制活動(dòng)，使學(xué)生在生活中接觸到法律，鼓勵(lì)其用法律解決問題，維護(hù)自身的合法權(quán)益。

45加強(qiáng)維權(quán)力量，建立校內(nèi)維權(quán)機(jī)構(gòu)

建立專門的維權(quán)部門，既可對(duì)校內(nèi)學(xué)生宣傳法律知識(shí)，加強(qiáng)其維權(quán)意識(shí)；又能對(duì)權(quán)益受到侵害的學(xué)生提供咨詢服務(wù)；還能站在學(xué)校的立場(chǎng)拿出應(yīng)急方案。

46完善醫(yī)療保險(xiǎn)和意外傷害保險(xiǎn)

頂崗實(shí)習(xí)學(xué)生由于身份受限，無(wú)法與企業(yè)簽訂勞動(dòng)合同，勞動(dòng)受傷無(wú)法按工傷保險(xiǎn)條例進(jìn)行補(bǔ)償，只能通過購(gòu)買商業(yè)保險(xiǎn)來(lái)預(yù)防此類意外的發(fā)生，其費(fèi)用可由學(xué)校、企業(yè)、學(xué)生商討決定。

參考文獻(xiàn)：

[1]喬宏哲高職學(xué)生頂崗實(shí)習(xí)權(quán)益保障風(fēng)險(xiǎn)分析及防范對(duì)策[J].黑河教育，2011

[2]徐志剛頂崗實(shí)習(xí)：學(xué)生權(quán)益存隱患教育與職業(yè)，2009（8）.

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篇（2）

中圖分類號(hào)：X24 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：2095-624X（2017）01-0022-01

1.r值沖突

環(huán)境保護(hù)是屬于公共物品的范疇，準(zhǔn)確地說是屬于非排他性但具備競(jìng)爭(zhēng)性的公共物品，也就是人們常說的“公地悲劇”“公共池塘”。依目前的情形來(lái)看，環(huán)境保護(hù)正處在產(chǎn)品供給不足期間，即政府無(wú)法滿足居民對(duì)環(huán)境質(zhì)量的高需求。其原因在于公共產(chǎn)品的提供僅僅是對(duì)價(jià)值的選擇、對(duì)利益偏好的選擇，不能同時(shí)滿足所有人的價(jià)值取向。這表明一部分人可以在價(jià)值上獲得滿足，而另一部分人則要作出價(jià)值犧牲。價(jià)值滿足群體與價(jià)值犧牲群體所追求的價(jià)值目標(biāo)是相互對(duì)立的、相沖突的。

從環(huán)境保護(hù)政策執(zhí)行的價(jià)值視角出發(fā)分析公共政策的相關(guān)行為主體的價(jià)值沖突，可以更好地理解政策在執(zhí)行過程中出現(xiàn)的扭曲和失誤。

政策的順利執(zhí)行將反映決策者的價(jià)值取向，若所作出的價(jià)值選擇只能滿足大多數(shù)人的利益，在這個(gè)過程中價(jià)值利益得到滿足和實(shí)現(xiàn)的則是價(jià)值滿足群體，價(jià)值利益受到損害或未能實(shí)現(xiàn)自身利益的則是價(jià)值犧牲群體。但是在實(shí)際的政策執(zhí)行過程中，價(jià)值滿足群體有可能因?yàn)閳?zhí)行的扭曲而成為價(jià)值犧牲群體，未能從政策中受益。反之亦然。

2.個(gè)人利益―公眾利益分析

在環(huán)保政策問題上，我們往往看到的政策執(zhí)行是根據(jù)執(zhí)行者的主觀意愿使其達(dá)到他們所謂的價(jià)值最大化的。因?yàn)檎賳T都有雙重身份：作為有私人權(quán)利和個(gè)人利益的個(gè)體，作為公共權(quán)力的行使者代表公共利益[1]。公共權(quán)力的誘惑性特征使少數(shù)行政官員在政策執(zhí)行過程中利用公共權(quán)力損害公共利益而謀取私利。

地方政府為了尋求更好的政績(jī)，促進(jìn)地區(qū)經(jīng)濟(jì)發(fā)展，廣泛地招商引資，但是引資進(jìn)來(lái)的企業(yè)往往是污染嚴(yán)重的或者是無(wú)法繼續(xù)生產(chǎn)而被關(guān)閉的企業(yè)。

作為公共利益的一方希望能盡快降低污染，走循環(huán)經(jīng)濟(jì)的道路，促進(jìn)社會(huì)的可持續(xù)發(fā)展；而有些地方官員則更多地從自身利益出發(fā)，追求短期的經(jīng)濟(jì)效益，鼓勵(lì)繼續(xù)發(fā)展生產(chǎn)。所以說，要使政策執(zhí)行者在執(zhí)行政策的過程中始終保持絕對(duì)的“價(jià)值中立”實(shí)際上是難以做到的。如果一項(xiàng)公共政策威脅到自身利益，那么執(zhí)行者無(wú)論出于公心或者私心，都有可能抵制這一政策，因而就使得該項(xiàng)政策很難順利有效地得到執(zhí)行[2]。

3.成本―收益分析

從成本―收益分析來(lái)看，環(huán)境保護(hù)政策在執(zhí)行過程中，地方政府能通過低耗能、低污染的燃料來(lái)生產(chǎn)產(chǎn)品、降低污染，但人們往往更看重在高污染環(huán)境下生產(chǎn)出的產(chǎn)品所獲得的超過以低耗能方式生產(chǎn)出的收益，即使周圍的一小部分人要忍受污染物的侵害。倘若每一個(gè)人都是利己者，那么將所有人產(chǎn)生的快樂（從產(chǎn)品中獲得的收益）加起來(lái)，它會(huì)超過周圍居民所受的痛苦。但是產(chǎn)品的實(shí)際收益的考量應(yīng)該顧及因產(chǎn)品生產(chǎn)所導(dǎo)致的他人痛苦和遭遇，如水質(zhì)污染。在現(xiàn)實(shí)中，收益卻往往無(wú)法得到很好的衡量，這也是問題的關(guān)鍵所在。

4.分析公共政策執(zhí)行的價(jià)值沖突的啟示和意義

公共政策的執(zhí)行不可能是一帆風(fēng)順的，即使所制定的公共政策近乎完美。公共政策執(zhí)行過程中如何協(xié)調(diào)各方利益，促進(jìn)正面價(jià)值的實(shí)現(xiàn)，規(guī)避負(fù)面價(jià)值，促使公共政策更加有效地執(zhí)行，還有一段很長(zhǎng)的路要走。和諧社會(huì)需要堅(jiān)持科學(xué)發(fā)展觀，走可持續(xù)發(fā)展的道路。所以，在環(huán)境保護(hù)問題上，我們應(yīng)該追求綠色的GDP，走資源節(jié)約型、環(huán)境友好型的循環(huán)經(jīng)濟(jì)模式，并將其作為對(duì)政府官員政績(jī)的考核內(nèi)容；各級(jí)環(huán)保部門實(shí)行垂直管理，人事任免權(quán)交由上級(jí)環(huán)保機(jī)構(gòu)，官員直接對(duì)其負(fù)責(zé)，賦予環(huán)保局更多的執(zhí)法權(quán)力和執(zhí)法力度；完善生態(tài)環(huán)境保護(hù)法規(guī)體系和管理體制，開展生態(tài)環(huán)境教育，鼓勵(lì)公眾參與環(huán)境保護(hù)，提高全民的環(huán)保意識(shí)；更重要的一點(diǎn)是將環(huán)境保護(hù)作為產(chǎn)業(yè)來(lái)開發(fā)，通過引用市場(chǎng)激勵(lì)機(jī)制，對(duì)逐漸稀缺的資源征收適當(dāng)?shù)亩愂眨▽?duì)因環(huán)境污染所造成的損失征收一定的稅收，以彌補(bǔ)他人的損失）；也可以將某地區(qū)的環(huán)境保護(hù)責(zé)任托付給某一個(gè)體或集體，并對(duì)其進(jìn)行管理。這些都將有利于環(huán)境保護(hù)政策的有效實(shí)施，改變“污染能賺錢，不污染不能賺錢”的怪現(xiàn)象。

篇（3）

【摘要】在靜態(tài)圖像上嵌入數(shù)字水印可以公示所有權(quán)，數(shù)字水印可以在靜態(tài)圖像著作權(quán)被侵犯時(shí)作為糾紛中的證據(jù)。借鑒國(guó)外立法與實(shí)踐，總結(jié)我國(guó)經(jīng)驗(yàn)，應(yīng)充分靈活運(yùn)用數(shù)字水印技術(shù)，保護(hù)靜態(tài)圖像著作權(quán)，發(fā)揮其人文、藝術(shù)價(jià)值。

關(guān)鍵詞 數(shù)字水??；靜態(tài)圖像；著作權(quán)保護(hù)

According to the static state picture work power of the numeral watermark protection research

Zhu Jin yi

【Abstract】Imbeding numeral watermark on the static state picture can Mr. show ownership， numeral watermark can at the static state picture work power drive infringe upon Be the proof in the dispute.Draw lessons from abroad lawmaking and practice， summary our country experience， should full use flexibly numeral watermark technique， protection the static state picture work power， exertive its humanities， art value.

【Key words】Numeral watermark;Static state picture;Work power protection

一、數(shù)字水印概況

（一、數(shù)字水印的概念

有學(xué)者認(rèn)為在使用者對(duì)靜態(tài)圖像著作權(quán)者造成損害而感到困擾的時(shí)候，使用圖像時(shí)也會(huì)對(duì)其真實(shí)性和完整性產(chǎn)生懷疑。作為保護(hù)多媒體信息真實(shí)性、完整性的傳統(tǒng)加密技術(shù)存在缺陷，數(shù)字水印是作為加密技術(shù)的補(bǔ)充，在多媒體信息的著作權(quán)保護(hù)和完整性驗(yàn)證方面得到迅猛的發(fā)展。

數(shù)字水印是可以以一種不容易被人所覺察到的手段插入一個(gè)或多個(gè)秘密信息，來(lái)實(shí)現(xiàn)隱蔽傳輸、存儲(chǔ)、標(biāo)注、身份驗(yàn)證、著作權(quán)保護(hù)等目的，并且這種方法不會(huì)影響到原載體的使用，為數(shù)字?jǐn)?shù)據(jù)權(quán)利人所享有的權(quán)利提供保護(hù)的一種技術(shù)手段。當(dāng)一個(gè)作品的著作權(quán)或所有權(quán)發(fā)生沖突時(shí)，可以提取嵌入原載體的水印來(lái)驗(yàn)證其權(quán)威性。

（二、數(shù)字水印的特征

1、魯棒性（穩(wěn)健性：

是指一個(gè)數(shù)字水印應(yīng)能承受大量的改動(dòng)，包括惡意處理和常規(guī)處理。惡意處理包括：慕改、偽造、 去除水印等。常規(guī)處理是指數(shù)字水印經(jīng)過載體圖像的某種改動(dòng)后，如經(jīng)過JPEG壓縮、濾波、掃描與復(fù)印、剪切、打印、圖像增強(qiáng)、二次抽樣、噪聲污染、二次t化A/D.D/A轉(zhuǎn)換或幾何變換和幾何失真（如平移旋轉(zhuǎn)、尺度拉伸等等操作， 圖像視覺效果保持不變且仍能被提取出或證明其的存在。

2、安全性：

是指水印信息嵌入后隨機(jī)分布于圖像中，因其位置較隱蔽，能夠抵抗一些非法攔截和破解而使水印不被破壞、刪除或者竊取。

3、透明性（隱藏性：

是指加入水印的圖像和原始圖像基本上相同，載體圖像沒有明顯的降低質(zhì)量的現(xiàn)象，且嵌入水印的數(shù)據(jù)經(jīng)過隱藏處理在視覺或聽覺上不可感知。

4、通用性：

因水印信息嵌入于數(shù)據(jù)而非文件本身，好的水印算法適用于多種文件格式和媒體格式，即使文件格式變換，相關(guān)水印的數(shù)據(jù)也不易丟失，通用性在某種程度上意味著易用性。

二、基于數(shù)字水印技術(shù)的靜態(tài)圖像著作權(quán)保護(hù)的可行性

（一、靜態(tài)圖像著作權(quán)保護(hù)的重要性

生活中，商家會(huì)設(shè)計(jì)獨(dú)特的有個(gè)性的商標(biāo)來(lái)代表自己的企業(yè)、公司等，而且最常用的就是用平面廣告來(lái)宣傳商品和活動(dòng)。這種以靜態(tài)圖像為表現(xiàn)方法不僅清晰明了，而且可以通過巧妙的設(shè)計(jì)留給人們長(zhǎng)久的印象，以及擴(kuò)大產(chǎn)品的銷售量。平面設(shè)計(jì)、廣告設(shè)計(jì)公司或者工作室也數(shù)不勝數(shù)。而隨之當(dāng)人們創(chuàng)新思維精神減弱、自主創(chuàng)新能力減退，對(duì)于設(shè)計(jì)較好的靜態(tài)圖像，就會(huì)非法使用、篡改該作品，甚至有以自己的名義進(jìn)行發(fā)表公開發(fā)行的侵權(quán)行為的產(chǎn)生。

于是，當(dāng)對(duì)于以靜態(tài)圖像為主要形式的作品的需求日益擴(kuò)大，靜態(tài)圖像著作權(quán)保護(hù)的重要性日益凸顯。

（二保護(hù)其著作權(quán)的靜態(tài)圖像

根據(jù)《中華人民共和國(guó)著作權(quán)法》，該法所稱的作品主要包括以下9項(xiàng)：（1文字作品；（2口述作品；（3音樂、戲劇、曲藝、舞蹈、雜技藝術(shù)作品；（4美術(shù)、建筑作品；（5攝影作品；（6電影作品和以類似攝制電影的方法創(chuàng)作的作品；（7工程設(shè)計(jì)圖、產(chǎn)品設(shè)計(jì)圖、地圖、示意圖等圖形作品和模型作品；（8計(jì)算機(jī)軟件；（9法律、行政法規(guī)規(guī)定的其他作品。其中美術(shù)、建筑作品，攝影作品，工程設(shè)計(jì)圖、產(chǎn)品設(shè)計(jì)圖、地圖、示意圖等圖形作品和模型作品等可以歸為靜態(tài)圖像的范疇?？梢婌o態(tài)圖像占著作權(quán)法保護(hù)的客體比例較大。

（三靜態(tài)圖像著作權(quán)保護(hù)的權(quán)利主體

靜態(tài)圖像的權(quán)利主體，是靜態(tài)圖像專有權(quán)利益的承擔(dān)者。通常來(lái)說成為權(quán)利主體必須具備兩個(gè)條件：一是有獨(dú)立的人格，二是經(jīng)法律確認(rèn)。對(duì)于靜態(tài)圖像的權(quán)利主體的確認(rèn)多數(shù)情況下并不困難。但是如果當(dāng)以下情況發(fā)生的時(shí)候，筆者認(rèn)為應(yīng)當(dāng)將嵌入數(shù)字水印認(rèn)為即是登記的形式，具有對(duì)抗效力：

某甲發(fā)表靜態(tài)圖像，并嵌有宣示自己為該靜態(tài)圖像所有權(quán)人或者著作權(quán)人的水印，而當(dāng)乙發(fā)現(xiàn)時(shí)宣稱自己才為該靜態(tài)圖像著作權(quán)人，與甲產(chǎn)生知識(shí)產(chǎn)權(quán)糾紛。

對(duì)于該種情況的發(fā)生，如果乙沒有足夠的證據(jù)證明自己為著作權(quán)人，則應(yīng)當(dāng)根據(jù)嵌入數(shù)字水印的時(shí)間的遲早判斷，認(rèn)為嵌入數(shù)字水印相當(dāng)于登記，具有創(chuàng)設(shè)和公式效力，判斷甲為該靜態(tài)圖像的著作權(quán)人。

（四靜態(tài)圖像著作權(quán)保護(hù)的權(quán)利內(nèi)容

靜態(tài)圖像著作權(quán)保護(hù)的權(quán)利內(nèi)容也就是靜態(tài)圖像的權(quán)利主體應(yīng)當(dāng)享有的權(quán)利種類，按傳統(tǒng)著作權(quán)理論可以分為精神權(quán)利和經(jīng)濟(jì)權(quán)利。

1、精神權(quán)利

靜態(tài)圖像是一種以簡(jiǎn)單形式來(lái)表現(xiàn)的智力成果。靜態(tài)圖像著作權(quán)人可以通過該種表現(xiàn)形式來(lái)表現(xiàn)自己的設(shè)計(jì)，或者通過畫面來(lái)表現(xiàn)抒發(fā)自己的情感。靜態(tài)圖像著作權(quán)人有權(quán)公開，有權(quán)要求對(duì)復(fù)制其作品的一方承認(rèn)其系靜態(tài)圖像的著作權(quán)人。

2、經(jīng)濟(jì)權(quán)利

權(quán)利人有權(quán)通過他人對(duì)其作品的利用獲得經(jīng)濟(jì)報(bào)酬。所以靜態(tài)圖像著作權(quán)人可以通過自己對(duì)其擁有的著作權(quán)，利用其進(jìn)行收益。比如平面廣告設(shè)計(jì)人可以通過為商家設(shè)計(jì)產(chǎn)品的平面廣告來(lái)收取經(jīng)濟(jì)報(bào)酬，再由宣傳商利用其作品進(jìn)行產(chǎn)品宣傳。經(jīng)濟(jì)權(quán)的權(quán)利內(nèi)容可以分為復(fù)制權(quán)、發(fā)行權(quán)、攝制權(quán)、播放權(quán)、展覽權(quán)等。其中靜態(tài)圖像權(quán)利主體主要通過復(fù)制權(quán)、展覽權(quán)獲取經(jīng)濟(jì)利益。

（五靜態(tài)圖像著作權(quán)糾紛案例分析及思考

在網(wǎng)絡(luò)環(huán)境中的真實(shí)糾紛案例少見，多數(shù)在現(xiàn)實(shí)生活中發(fā)生糾紛。下列為案例舉例：

丁長(zhǎng)祿是張家口市群藝館離休干部、中國(guó)攝影家協(xié)會(huì)河北分會(huì)會(huì)員，今年已73歲。2000年1月初，丁長(zhǎng)祿在購(gòu)買由張家口市人民政府、張家口市函件廣告局設(shè)計(jì)、制作、銷售及國(guó)家郵政局發(fā)行的2000年賀年（有獎(jiǎng)明信片時(shí)發(fā)現(xiàn)，有一題為“中國(guó)張家口”的裝幀圖案，其主體畫面是盜用自己拍攝的展現(xiàn)張家口代表景觀“大境門”的景物照片《大好河山》。丁長(zhǎng)祿認(rèn)為，他作為《大好河山》作品的作者，依法對(duì)作品享有著作權(quán)，三被告未經(jīng)許可，以贏利為目的，不署名使用作品，并對(duì)作品進(jìn)行剪裁和添附，破壞了作品原有的完整性，故起訴到法院。法院經(jīng)審理認(rèn)為：攝影作品《大好河山》的作者是丁長(zhǎng)祿，他對(duì)這一攝影作品享有著作權(quán)；張家口市人民政府是《中國(guó)張家口》2000年賀年（有獎(jiǎng)明信片的設(shè)計(jì)者，因該明信片內(nèi)容所產(chǎn)生的民事責(zé)任應(yīng)由張家口市人民政府承擔(dān)；張家口市人民政府在未經(jīng)丁長(zhǎng)祿許可的情況下，對(duì)這一攝影作品進(jìn)行修改及未給丁長(zhǎng)祿署名的行為，侵犯了丁長(zhǎng)祿對(duì)這一攝影作品所享有的修改權(quán)和署名權(quán)，應(yīng)承擔(dān)相應(yīng)的民事責(zé)任；國(guó)家郵政局作為2000年賀年（有獎(jiǎng)明信片的發(fā)行者，并且在該明信片上也注明了“國(guó)家郵政局發(fā)行”，因此，國(guó)家郵政局應(yīng)對(duì)明信片所涉及的著作權(quán)問題與張家口市人民政府共同承擔(dān)民事責(zé)任。法院依據(jù)《中華人民共和國(guó)著作權(quán)法》的相關(guān)規(guī)定，做出上述判決。

通過此案可以再次驗(yàn)證靜態(tài)圖像因?yàn)樾问胶?jiǎn)單，容易被模仿、抄襲，可以通過技術(shù)手段再加以剪接、添加等篡改，而且又是因?yàn)槠湫问胶?jiǎn)單，對(duì)于現(xiàn)實(shí)生活中靜態(tài)圖像著作權(quán)發(fā)生的糾紛較難進(jìn)行解決。

三、國(guó)際基于數(shù)字水印的靜態(tài)圖像著作權(quán)保護(hù)的立法及啟示

不管發(fā)達(dá)國(guó)家還是發(fā)展中國(guó)家，經(jīng)常會(huì)有對(duì)靜態(tài)圖像的使用，也不論其數(shù)字環(huán)境發(fā)展如何，在一定程度上，靜態(tài)圖像的著作權(quán)面臨著挑戰(zhàn)。對(duì)此，不少國(guó)家和組織做出過嘗試，針對(duì)數(shù)字環(huán)境下的知識(shí)產(chǎn)權(quán)執(zhí)法出臺(tái)相應(yīng)法律法規(guī)。在此我們主要討論國(guó)際在靜態(tài)圖像著作權(quán)保護(hù)上的立法及對(duì)我們的啟示。

在國(guó)際角度上，涉及著作權(quán)保護(hù)的公約主要有《反假冒貿(mào)易協(xié)議》（ACTA、《伯爾尼保護(hù)文學(xué)和藝術(shù)作品公約》（Berne Convention for the protection of Literary and Artistic works、《世界知識(shí)產(chǎn)權(quán)組織表演和錄音制品條約》（WIPO Performances and Phonograms Treaty等。

（一《反假冒貿(mào)易協(xié)議》與運(yùn)用數(shù)字水印以期保護(hù)權(quán)利管理電子信息

《反假冒貿(mào)易協(xié)議》作為最新的知識(shí)產(chǎn)權(quán)執(zhí)法國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，其核心內(nèi)容第二章與《TRIPS協(xié)定》規(guī)定的知識(shí)產(chǎn)權(quán)執(zhí)法大同小異，而最大的區(qū)別就在于ACTA規(guī)定了有關(guān)數(shù)字環(huán)境下的知識(shí)產(chǎn)權(quán)執(zhí)法。在這里主要討論其規(guī)定的關(guān)于權(quán)利管理電子信息的義務(wù)方面的內(nèi)容。

“權(quán)利管理信息”是指附著在作品、表演、錄音制品的復(fù)制品上的信息，或作品表演、錄音制品在向公眾進(jìn)行傳播或者提供時(shí)所出現(xiàn)的信息，包括：1.識(shí)別作品、表演、錄音制品、作者、表演者、錄音制品制作者以及在作品、表演和錄音制品中的所有權(quán)利人的信息；2.有關(guān)作品、表演、錄音制品的使用的條款與條件的信息；3.代表上述信息的任何數(shù)字或代碼。并且在ACTA第27條第7款規(guī)定：“為了保護(hù)權(quán)利管理電子信息，締約方應(yīng)規(guī)定充分和有效的法律救濟(jì)辦法，制止任何人明知或就民事救濟(jì)而言應(yīng)知其行為會(huì)誘使、促成、便利或掩蓋對(duì)任何版權(quán)或鄰接權(quán)的侵害，卻未經(jīng)授權(quán)而實(shí)施下列行為：（I去除或改變?nèi)魏螜?quán)利管理電子信息；（Ⅱ明知權(quán)利管理電子信息未經(jīng)許可已被去除或改變，卻發(fā)行、為發(fā)行目的而進(jìn)口、廣播、向公眾傳播或提供作品、表演、錄音制品的復(fù)制件?！?/p>

通過ACTA的相關(guān)規(guī)定，可以看出權(quán)利管理信息是提供作品的權(quán)利人等相關(guān)信息，保護(hù)好權(quán)利管理電子信息在一定程度上等于保護(hù)好作品的著作權(quán)。而且在第27條第7款也規(guī)定了為了保護(hù)權(quán)利管理電子信息，締約方應(yīng)規(guī)定充分和有效的法律救濟(jì)辦法。對(duì)于本文靜態(tài)圖像著作權(quán)侵權(quán)的救濟(jì)辦法，數(shù)字水印是絕佳首選。數(shù)字水印既可以在作品中表現(xiàn)作品的著作權(quán)人等相關(guān)信息，又可以通過其魯棒性等特點(diǎn)，保護(hù)其權(quán)利管理電子信息。

（二《伯爾尼保護(hù)文學(xué)和藝術(shù)作品公約》與靜態(tài)圖像難以保護(hù)的原因分析

伯爾尼公約是世界上第一個(gè)國(guó)際版權(quán)公約，原始簽字國(guó)就有10國(guó)，是國(guó)家注重版權(quán)的國(guó)際保護(hù)的體現(xiàn)。

《伯爾尼公約》保護(hù)的作品范圍是締約國(guó)國(guó)民的或在締約國(guó)內(nèi)首次發(fā)表的一切文學(xué)藝術(shù)作品。其中“文學(xué)藝術(shù)作品”有圖書、講課、演講、講道、戲劇、啞劇、舞蹈、樂曲、電影作品、圖畫、建筑、雕塑、攝影作品，實(shí)用藝術(shù)品，地理學(xué)、解剖學(xué)、建筑學(xué)或科學(xué)方面的圖表、圖示及立體作品等。其次還包括“演繹作品”，即翻譯、改編、樂曲整理，以某一文學(xué)或藝術(shù)作品的其他改造，只要不損害原作的著作權(quán)，這種改造就得到與原作同等的保護(hù)。圖書、圖畫、圖標(biāo)、圖示等靜態(tài)圖像包含其中，公約既保護(hù)經(jīng)濟(jì)權(quán)利也保護(hù)精神權(quán)利。

《伯爾尼公約》中有規(guī)定關(guān)于平面設(shè)計(jì)的保護(hù)，可見對(duì)于平面設(shè)計(jì)等靜態(tài)圖像的著作權(quán)保護(hù)開始上心?！霸谧袷乇竟s第七條第四款之規(guī)定的前提下，本同盟各成員國(guó)得通過國(guó)內(nèi)立法規(guī)定其法律在何種程度上適用于實(shí)用藝術(shù)作品以及工業(yè)品平面和立體設(shè)計(jì)，以及此種作品和平面與立體設(shè)計(jì)受保護(hù)的條件。在起源國(guó)僅僅作為平面與立體設(shè)計(jì)受到保護(hù)的作品，在本同盟其他成員國(guó)只享受各該國(guó)給予平面和立體設(shè)計(jì)的那種專門保護(hù)；但如在該國(guó)并不給予這種專門保護(hù)，則這些作品將作為藝術(shù)作品得到保護(hù)?！?/p>

通過解讀，可以發(fā)現(xiàn)《伯爾尼公約》中，靜態(tài)圖像的保護(hù)并不注重，《伯爾尼公約》著重在于文學(xué)作品和音樂作品等上面，規(guī)定了有關(guān)文學(xué)作品和藝術(shù)作品專有權(quán)利和各國(guó)對(duì)其的保護(hù)措施。根據(jù)公約第七條的敘述，如果同盟的成員國(guó)對(duì)實(shí)用藝術(shù)作品平面設(shè)計(jì)和工業(yè)品平面設(shè)計(jì)沒有專門的保護(hù)，將作為藝術(shù)作品予以保護(hù)。而定性為藝術(shù)作品的話，在《伯爾尼公約》中的范圍稍稍廣泛了些，沒有較好的對(duì)應(yīng)的規(guī)定，不如文學(xué)作品和音樂作品保護(hù)規(guī)定全面?？梢娮鳛楫?dāng)代社會(huì)用處較多的可以呈現(xiàn)各種形式作品與設(shè)計(jì)想法的靜態(tài)圖像，其著作權(quán)在《伯爾尼公約》中不能得到全方位的保護(hù)。第一，從主體來(lái)看，靜態(tài)圖像的形式簡(jiǎn)單，在數(shù)字環(huán)境中僅僅只有JPG、BMP等格式，容量小、儲(chǔ)存簡(jiǎn)單，在現(xiàn)實(shí)中可能也只是一張紙的份量，不如其他作品的表現(xiàn)時(shí)所需步驟復(fù)雜。第二，靜態(tài)圖像其著作權(quán)認(rèn)證困難，創(chuàng)造一份以靜態(tài)圖像為表現(xiàn)形式的作品所需要的時(shí)間較少，并且靜態(tài)圖像容易復(fù)制，以至于在知識(shí)產(chǎn)權(quán)糾紛中，靜態(tài)圖像的著作權(quán)很難確定。第三，公約的規(guī)定有一定程度上的口號(hào)的意味，沒有很多地對(duì)保護(hù)作品著作權(quán)的相關(guān)機(jī)構(gòu)的職責(zé)與職能的規(guī)定，也就限制了對(duì)以靜態(tài)圖像為表現(xiàn)方式的作品的著作權(quán)保護(hù)水平。

（三《世界知識(shí)產(chǎn)權(quán)組織表演和錄音制品條約》與靜態(tài)圖像著作權(quán)人精神權(quán)利

該條約制定所保護(hù)的客體是表演和錄音制品，但是其中的條款對(duì)于靜態(tài)圖像的保護(hù)有很好的示范和借鑒作用。

篇（4）

這次，我和動(dòng)植物專家陳慶一起前往臨滄市，在當(dāng)?shù)叵驅(qū)У膸ьI(lǐng)下，深入保護(hù)區(qū)的核心區(qū)域，希望通過親身考察，了解目前保護(hù)區(qū)的森林資源基本狀況，同時(shí)還希望通過紅外相機(jī)，拍攝到一些珍稀動(dòng)物的影像。

1 路邊小飯館的新奇食材

路邊有家小飯館，看上去有些簡(jiǎn)陋，但菜肴所用食材很新奇，像“獨(dú)角仙”、“地雷蜂”等名字有些嚇人的昆蟲，在這里都成了美食。

天蒙蒙亮，我們乘車從昆明出發(fā)前往臨滄市。半個(gè)月前，我曾隨綠色和平組織去過那里，調(diào)查天然林遭破壞的狀況，那是我第一次去到南滾河保護(hù)區(qū)南側(cè)，根據(jù)對(duì)海拔、地勢(shì)和林木的生長(zhǎng)方向的分析，我判定在南滾河流域內(nèi)，有一片保存較好的原始森林。

陳慶是動(dòng)植物專家，他在路上沒有絲毫疲倦，總是拿著手機(jī)朝車窗外拍照。出發(fā)前，我的慢性咽炎就發(fā)作了，一路上咳嗽不止，只能不停地喝水來(lái)緩解喉嚨的癢痛。到吃午飯時(shí)，汽車停在了一個(gè)三叉路口，邊上有家小飯館，看上去有些簡(jiǎn)陋，但菜肴所用食材很新奇，像“獨(dú)角仙”、“地雷蜂”等名字有些嚇人的昆蟲，在這里都成了美食。看到飯店老板養(yǎng)了蜂，陳慶便從蜂巢里捏出一只剛羽化的幼蟲，對(duì)我說：“吃了它，咳嗽會(huì)好點(diǎn)?！蔽医舆^這只肉白色的幼蟲，放在嘴里輕輕一嚼，一股濃郁的苦澀味瞬間充滿了口腔，一連吃了幾只后，我的嗓子果然舒服了很多。飯店老板見狀，讓我喝了一杯用樹葉泡的茶，并說：“你吃得太多了，喝杯這種茶水，不然一會(huì)胃會(huì)疼?！标悜c入鄉(xiāng)隨俗，點(diǎn)了一份竹鼠辣椒飯，而我還是只吃了一碗泡面。

下午6點(diǎn)，我們到達(dá)目的地，與當(dāng)?shù)叵驅(qū)Оs匯合。阿榮只有19歲，但陳慶看到他走路的樣子，就對(duì)我說他是走山路的好手。吃晚飯時(shí)，阿榮要了一瓶白酒，他邊喝酒邊給我們介紹了保護(hù)區(qū)的基本情況，他說：“南滾河自然保護(hù)區(qū)在全國(guó)知名度不高，外界對(duì)其了解很少，但在保護(hù)區(qū)的核心區(qū)有許多珍貴動(dòng)物，正是這個(gè)原因，現(xiàn)在深入核心區(qū)偷獵的人日益增多，不少野生動(dòng)物不得不離開核心區(qū)，開始向游蕩……”此后他還特意叮囑我們說：“早在上世紀(jì)50年代末，山里的林子就開始遭到砍伐，現(xiàn)在不少地方的山是光禿禿的，我們不要往南走得太深，在那邊遇到當(dāng)?shù)孬C人會(huì)很麻煩，他們當(dāng)中很多人都是無(wú)業(yè)人員……”我明白，阿榮是擔(dān)心我們被搶劫。

2 營(yíng)地突遇眼鏡王蛇

那條眼鏡王蛇不停地吐著信子，發(fā)出令人寒顫的“咝咝”聲。此時(shí)，一人一蛇就像兩個(gè)正在的武士，眼睛直直地盯著對(duì)方，誰(shuí)也不敢轉(zhuǎn)移視線。

第二天清晨，我們整理好物資和設(shè)備，在當(dāng)?shù)乇撤虻膸椭?，向保護(hù)區(qū)出發(fā)。我們沿著泥濘的山路艱難地走了幾小時(shí)，到達(dá)山溪邊的一處空地，商量后決定將這里作為本次考察的大本營(yíng)，背夫卸掉物資和設(shè)備后，我們就開始收拾各自的行李。就在砍伐竹子來(lái)支撐防水布的時(shí)候，陳慶突然驚呼起來(lái)：“眼鏡王蛇！”我回頭看去，只見陳慶拿起身邊砍下的竹竿，迅速擺出防御姿勢(shì)，眼鏡王蛇受到驚擾，也立馬豎立起脖子，口中不停地吐著蛇信子，發(fā)出令人寒顫的“咝咝”聲。此時(shí)，一人一蛇就像兩個(gè)決斗的武士，眼睛直直地盯著對(duì)方，誰(shuí)也不敢轉(zhuǎn)移視線。我在一旁興奮地喊道：“阿榮，能不能抓住它！”他卻回答道：“你不知道，這種毒蛇殺了我們這里的多少獵人?！蔽冶緛?lái)還著迷于這種世界上最大的毒蛇，但聽到阿榮這么一說，也只得放棄了近距離拍攝的念頭――我很清楚，萬(wàn)一被毒蛇咬到，其毒液會(huì)讓我在短短一分鐘之內(nèi)昏迷，如果不及時(shí)救治就會(huì)危及生命。

此時(shí)，陳慶用竹竿控制住了他與蛇的距離，而那條眼鏡王蛇直立的身子，幾乎和陳慶的胯骨一樣高，并不停地張嘴恐嚇，隨時(shí)準(zhǔn)備攻擊。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)判斷，眼鏡王蛇在張大嘴巴時(shí)，并不想真正進(jìn)攻，或許是我們?cè)诳持褡訒r(shí)，不小心誤入了它的巢穴，而它只想嚇走我們，如果我們現(xiàn)在將其趕走，它很有可能還會(huì)回來(lái)，因?yàn)樗睦铣簿驮谶@附近。因此繼續(xù)在這里扎營(yíng)已不是明智之舉，但此時(shí)背夫已經(jīng)下山，我們無(wú)法臨時(shí)更換營(yíng)地。正當(dāng)我們不知如何是好，阿榮說：“只要我們晚上將火生起，蛇自然就會(huì)搬家?！苯┏至藥追昼姾?，那條眼鏡王蛇看我們沒有離開的意思，終于掉頭朝山溪對(duì)面游過去，當(dāng)它的身子全部暴露在外時(shí)，我們目測(cè)到其體長(zhǎng)竟超過3米！

搭好營(yíng)地，阿榮獨(dú)自去挖竹筍，我和陳慶則到對(duì)面山坡上去安放紅外相機(jī)。突然，叢林深處傳來(lái)一聲好像石頭落水的聲音，陳慶警覺地說：“不對(duì)，這是獵槍的聲音?！睋?jù)我的朋友講，他此前在保護(hù)區(qū)調(diào)查食肉動(dòng)物時(shí)，就有安裝在樹上的紅外線相機(jī)被獵人用槍打爛。這里的獵人通常以靈貓類和偶蹄類動(dòng)物為狩獵對(duì)象，靈貓類動(dòng)物主要生活在長(zhǎng)有大片果樹的區(qū)域，而像野豬、黃麂這樣的偶蹄類動(dòng)物，則大多出現(xiàn)在鹽堿地周邊，因此果樹區(qū)和鹽堿地都是獵人活動(dòng)頻繁的區(qū)域，我們決定避開這兩類區(qū)域，謹(jǐn)慎選擇安放位置。

在野外安放紅外相機(jī)，除了要避免人為破壞，還需注意很多小細(xì)節(jié)。最令人頭痛的是――昆蟲能通過遺留在相機(jī)表面的汗液嗅到鹽分，發(fā)現(xiàn)安裝的相機(jī)。如果蛾子的翅膀擋住了接收器，就會(huì)導(dǎo)致相機(jī)不停地拍攝，嚴(yán)重?fù)p耗電量，影響其正常工作。因此在安裝結(jié)束后，我們還專門用棉花蘸上清水，將相機(jī)仔細(xì)地擦拭了一遍，清洗掉遺留鹽分，避免昆蟲前來(lái)?yè)v亂。

3 鹽堿地蹲點(diǎn)拍攝

不知過了多久，正當(dāng)我用手扯下一只爬到臉上的螞蟥時(shí)，鹽堿地對(duì)面的林子里有了動(dòng)靜，阿榮用手勢(shì)朝我暗示：有什么動(dòng)物來(lái)了……

第三天早晨醒來(lái)時(shí)，我覺得脖子后面有些僵硬，睡袋好像緊緊地粘在了皮膚上。我伸手一摸，手上就沾滿了鮮血，瞬間便反應(yīng)了過來(lái)：脖子里肯定鉆進(jìn)了螞蟥。我迅速起身翻開睡袋，只見一只吸飽了我血液的螞蝗，身體膨脹得碩大，吸盤上正往外滴血，我撿起螞蝗扔進(jìn)了火堆，處理傷口。

今天，阿榮要帶我們?nèi)ヒ黄嚯x營(yíng)地大約8公里的鹽堿地，到那里蹲守拍攝偶蹄類動(dòng)物。早飯吃了幾塊臘肉，我們便沿著泥濘小路出發(fā)，樹葉在頭上掠過，時(shí)時(shí)有螞蝗掉落在身上，每走50米左右，我們就要停下來(lái)檢查，把掉在身上的螞蟥彈開。

突然，前方林子里傳來(lái)一陣隱約的交談聲，阿榮用當(dāng)?shù)卦挻蠛傲艘宦?，林子里很快走出?lái)兩個(gè)人，他們一人肩上扛著自制的獵槍，一人手上拎著一只還在滴血的動(dòng)物，這兩人是阿榮的朋友，相互打了招呼后便聊了起來(lái)。那人告訴我們，他拎的是一只小赤麂，保護(hù)區(qū)周邊山里的獵人很多，有時(shí)還有從緬甸那邊過來(lái)的獵人，他們都想抓最值錢的動(dòng)物，打到其他不值錢的，要么自己吃，要么拿到集市上換點(diǎn)酒錢。

同獵人告別后，我們繼續(xù)前行，一小時(shí)后到達(dá)鹽堿地。雨林中，許多動(dòng)物會(huì)經(jīng)常前往鹽堿地，通過啃噬鹽堿地中的泥土來(lái)補(bǔ)充身體所需的鹽分。這塊鹽堿地大小與籃球場(chǎng)相近，里面除了留有獵人雜亂的腳印外，還有一些水鹿和野豬來(lái)過的痕跡。我們拿著相機(jī)隱蔽在樹叢中，靜靜地等待動(dòng)物的光顧。

不知過了多久，正當(dāng)我用手扯下一只爬到臉上的螞蟥時(shí)，鹽堿地對(duì)面的林子里有了動(dòng)靜，阿榮用手勢(shì)朝我暗示，意思是來(lái)了一群山雞，叫我準(zhǔn)備好拍攝，當(dāng)領(lǐng)頭的山雞謹(jǐn)慎地走向鹽堿地中央時(shí)，我才看清那其實(shí)是一群白鷴。曾幾何時(shí)，白鷴是極其普通的鳥類，在我國(guó)很多地方都能見到，但由于生態(tài)環(huán)境的惡化和人類的大肆捕殺，如今已很少見到其身影。在接下來(lái)的時(shí)間，我們只拍到了一些常見的動(dòng)物，并沒有特別的收獲?；貭I(yíng)地的路上，我在一棵樹上看到幾道陳年爪印，阿榮告訴我：“這些都是虎、豹等大型動(dòng)物，為了標(biāo)識(shí)自己的領(lǐng)地范圍而留下來(lái)的?！?/p>

陳慶取回在野外安放了數(shù)天的紅外相機(jī)，連接上電腦打開照片，看到果子貍、豪豬等白天不易見到的小型動(dòng)物都被拍到，這比我們?cè)邴}堿地蹲點(diǎn)拍攝收獲大多了。傍晚聊天時(shí)，我問阿榮：“現(xiàn)在這個(gè)地方還有老虎嗎？”他肯定地回答道：“我保證沒有，我們這邊的獵人已經(jīng)很久沒見過老虎留下的蹤跡了。如果想見到老虎，就必須冒險(xiǎn)前往緬甸，甚至從緬甸再往西才能看到?！眲傉f到此，阿榮忽然望著距離營(yíng)地不足50米遠(yuǎn)的一棵樹，他拿起手電照射過去，興奮地說：“是椰子貓?！?/p>

4 保護(hù)區(qū)現(xiàn)狀令人堪憂

大型貓科動(dòng)物對(duì)生存環(huán)境的要求非常苛刻，它們不僅要有足夠的食物來(lái)源，還要有大面積的棲息地。

我們?cè)谡{(diào)查時(shí)發(fā)現(xiàn)：在保護(hù)區(qū)內(nèi)，動(dòng)植物之間建立起了緊密的生態(tài)關(guān)系：小型動(dòng)物以叢林中的成熟果實(shí)為生，并通過排便傳播種子，與之保持共生關(guān)系。而生活在地面上的豹貓、豬獾等食腐性動(dòng)物主要吃動(dòng)物腐肉，這樣能抑制森林疾病的傳播，保證保護(hù)區(qū)內(nèi)生態(tài)系統(tǒng)的良性循環(huán)。同時(shí)，大型食肉動(dòng)物生活在食物鏈的頂端，它們捕殺小型動(dòng)物，控制其數(shù)量，保證保護(hù)區(qū)生態(tài)系統(tǒng)的正常運(yùn)轉(zhuǎn)，并維持其生態(tài)平衡。如今，長(zhǎng)期偷獵導(dǎo)致野生動(dòng)物逐漸減少，同時(shí)，人類對(duì)森林的破壞讓動(dòng)物失去了棲息地，保護(hù)區(qū)內(nèi)的生態(tài)系統(tǒng)正在慢慢失去平衡。

篇（5）

超分子化合物是微觀單元以非共價(jià)鍵弱相互作用力結(jié)合而成的有序締合體 [1-2]。超分子化合物具有識(shí)別、記憶、變換和傳輸?shù)裙δ?，因此在藥物、光化學(xué)分子器件、膜材料[3-5]等方面應(yīng)用廣泛。其中藥物包合物是超分子研究?jī)?nèi)容的獨(dú)特領(lǐng)域，研究藥物包合體系中分子間的相互作用機(jī)制，可為進(jìn)一步深入理解包合物的理化性質(zhì)、主客體包合反應(yīng)機(jī)制以及包合物選擇性結(jié)合受體的識(shí)別機(jī)制提供依據(jù)，藥物包合物已成為當(dāng)前超分子領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。

脫氧土大黃苷（DES，結(jié)構(gòu)式見圖1）主要來(lái)源于天山大黃的蓼科植物，為二苯乙烯衍生物，屬于茋苷。DES在抗腫瘤、抗氧化、降低II型糖尿病的血糖及提高機(jī)體免疫力等方面有顯著療效。但DES的水溶性極差，極大限制了該藥物在制劑上的開發(fā)應(yīng)用。如將其制備成超分子包合物，可增加水溶性、提高穩(wěn)定性，達(dá)到改善藥物生物利用度的目的。而制備具有實(shí)用價(jià)值的DES包合物，選擇一種理想的藥物包合載體材料為關(guān)鍵之一。

β-環(huán)糊精（β-CD，結(jié)構(gòu)式見圖1）在環(huán)糊精種類中應(yīng)用最廣[6-8]。適宜的空腔大小使β-CD成為近年發(fā)展起來(lái)的新型藥物包合材料。β-CD以疏水性空隙經(jīng)范德華力及非傳統(tǒng)疏水作用力容納或插入藥物分子，形成的藥物包合物又稱“分子膠囊”，可不同程度改善藥物溶解性，降低外在條件對(duì)藥物分子的影響，提高藥物的穩(wěn)定性。目前已有大量有關(guān)環(huán)糊精包合藥物的報(bào)道[9-13] ，但對(duì)藥物包合物理論、包合物的結(jié)構(gòu)分析等還有待開展深入的研究。

本研究選擇DES為客體，含有7個(gè)葡萄糖分子的β-CD為載體，合成包合物并進(jìn)行分析鑒定[14-29]，確定包合比、計(jì)算理論參數(shù)，為該類藥物超分子包合物的研究奠定前期基礎(chǔ)。目前，β-CD-DES包合體系的研究未見文獻(xiàn)報(bào)道。

1 材料

F-4500型熒光光度計(jì)（Hitachi，日本）；UV-2450型紫外-可見分光光度計(jì)（Shimadzu，日本）；DZF-6020型真空恒溫干燥箱（上海林頻實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；PS-1000型磁力攪拌恒溫水浴槽（Eleya，日本）。

脫氧土大黃苷（≥96%，賽納斯特化學(xué)）；β-CD（≥96%，上海阿拉丁試劑公司）；無(wú)水乙醇（≥99.7%，天津市永大化學(xué)試劑有限公司）；其余試劑均為分析純。試驗(yàn)用水均為二次蒸餾水。

2 包合物的制備及表征

2.1 β-CD-DES包合物的制備 DES 0.02 g 溶于50%乙醇，β-CD 0.5 g溶于60 ℃二次蒸餾水。將DES溶液緩慢滴入β-CD溶液中，60 ℃回流并攪拌反應(yīng)2 h。反應(yīng)液冷卻至室溫后過濾，沉淀用乙醇、蒸餾水洗滌數(shù)次，100 ℃恒溫干燥5 h。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 50%乙醇配制DES對(duì)照液 （20～50 mg·L-1），紫外掃描并在λmax 300 nm波長(zhǎng)處讀取其吸光度，繪制DES的濃度（c）～吸光度（A）標(biāo)準(zhǔn)曲線，數(shù)據(jù)擬合獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程。β-CD在200～400 nm無(wú)紫外吸收，對(duì)DES的紫外-可見吸收光譜無(wú)干擾。測(cè)定β-CD-DES包合物體系的吸光度，利用DES的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算游離DES的濃度，進(jìn)而計(jì)算包結(jié)比等參數(shù)。

2.3 熒光光譜表征 熒光光譜儀在λex 260 nm，λem500～600 nm分別測(cè)定1.2×104mg·L-1的β-CD，DES，β-CD-DES （物理混合）和β-CD-DES包合物體系的熒光發(fā)射譜，比較分析光譜特征獲得β-CD-DES包合物體系的熒光表征譜。

2.4 包合物的包合率測(cè)定 定量包合物溶于50%乙醇，在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)其紫外吸光度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程計(jì)算DES的濃度，代入公式（1）計(jì)算包合率。

2.5 包合反應(yīng)包結(jié)比及熱力學(xué)函數(shù)的測(cè)定 分別配制30，60，90，120，150 mg·L-1 β-CD對(duì)照液，測(cè)其熒光光譜，按Hildebrand-Benesi方程以1/（F-F0）對(duì)1/[β-CD]n作圖，求算包結(jié)比及反應(yīng)熱力學(xué)函數(shù)。

3 結(jié)果與討論

3.1 DES與β-CD 的包合過程 β-CD包合DES反應(yīng)方程式見圖2。

β-CD分子略呈錐形的中空?qǐng)A筒立體環(huán)狀結(jié)構(gòu)，使得環(huán)糊精具有外親水內(nèi)疏水的特性，這種特性使得環(huán)糊精能夠包合各種形狀大小與環(huán)糊精內(nèi)腔相匹配的疏水性客體分子，以此提高客體分子的溶解性及穩(wěn)定性。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線 對(duì)DES對(duì)照溶液在300 nm波長(zhǎng)處的吸光度進(jìn)行測(cè)定，數(shù)據(jù)擬合獲得線性回歸方程為c=0.051 3+0.003 5A（r=0.995 2，SD=0.004 1， n=7， P

3.3 熒光光譜分析 DES，β-CD-DES包合物，β-CD-DES （物理混合）和β-CD的熒光發(fā)射譜見圖3。DES形成β-CD-DES包合物后出現(xiàn)明顯的熒光猝滅現(xiàn)象，表明DES分子嵌入β-CD的環(huán)狀圓筒結(jié)構(gòu)中，溶液中游離態(tài)DES濃度降低，導(dǎo)致熒光強(qiáng)度降低。而β-CD-DES（物理混合）只是簡(jiǎn)單的2種化合物物理混合，與β-CD熒光譜圖幾乎沒有差別，這是因?yàn)槿芤褐泻羞^量β-CD和微量DES，所以混合物的熒光強(qiáng)度主要以游離β-CD的熒光強(qiáng)度表現(xiàn)出來(lái)，表明物理混合中藥物未被環(huán)糊精包合。

圖3為固定激發(fā)波長(zhǎng)條件下，體系的發(fā)射熒光強(qiáng)度與掃描發(fā)射波長(zhǎng)關(guān)系的二維熒光光譜圖?？陀^上體系的熒光強(qiáng)度與激發(fā)波長(zhǎng)、發(fā)射波長(zhǎng)均有關(guān)系，應(yīng)該是一種三維函數(shù)譜，即三維熒光光譜更能詳細(xì)描述藥物包合物體系的結(jié)構(gòu)特征變化。β-CD，DES，β-CD-DES （物理混合）和β-CD-DES包合物的三維熒光譜見圖4。

從圖4可見，β-CD與DES的3D熒光譜各有其特征，β-CD的熒光發(fā)射譜中出現(xiàn)多個(gè)指紋峰，但強(qiáng)度明顯弱于DES的3D指紋峰。β-CD-DES（物理混合）包含了完整的DES特征指紋峰，說明β-CD與藥物DES的物理混合沒有引起藥物的任何改變，即沒有形成有效包合物。β-CD-DES包合物中保留了β-CD的特征指紋峰，DES的特征指紋峰發(fā)生明顯變化。其中，圖4（B）圖中的峰4未出現(xiàn)在圖4（D）中，峰5發(fā)射波長(zhǎng)藍(lán)移了7 nm，且熒光強(qiáng)度減弱，表明分子間作用力形成的復(fù)合物改變了藥物體系的空間結(jié)構(gòu)。由此判斷成功合成包合物，這與二維熒光法測(cè)得的結(jié)果相符。

3.4 包合物的包合率 包合物顆粒細(xì)小，顏色介于β-CD和DES之間。將測(cè)得包合物的吸光度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程式，進(jìn)而由公式（1）求得包合物的包合率為38%。

3.5 DES與β-CD的包結(jié)比及結(jié)合常數(shù) 結(jié)合常數(shù)是衡量主體β-CD與客體藥物包結(jié)能力的大小，可以表征包合物的穩(wěn)定性及包合反應(yīng)的難易程度。在主體濃度大于客體濃度條件下，可采用Hildebrand-Benesi公式（2）獲得包合物的結(jié)合常數(shù)。

式中，F(xiàn)為不同濃度β-CD的熒光強(qiáng)度；F0為客體DES熒光強(qiáng)度；F∞為包合物的熒光強(qiáng)度。將試驗(yàn)數(shù)據(jù)按1/（F-F0）對(duì)1/[β-CD]n （n=1，2，3……）作圖，由直線的截距與斜率可求得結(jié)合常數(shù)K。

根據(jù)公式（2）做試驗(yàn)數(shù)據(jù)擬合圖，n取值1～5。從擬合結(jié)果看，當(dāng)n=2時(shí)，1/（F-F0）對(duì)1/[β-CD]2作圖效果最優(yōu)，獲得良好的線性關(guān)系，說明主客體間形成2∶1的包合物，1/（F-F0）對(duì)1/[β-CD]2的關(guān)系見圖5。

從圖5可見，不同溫度條件下，1/（F-F0）～1/[β-CD]2的線性關(guān)系良好（r>0.990 0），線性回歸方程見表1，說明β-CD-DES包合物的包結(jié)比為2∶1。包合物的結(jié)合常數(shù)見公式（3）。

式中，[DES]為被包合藥物的平衡濃度；[β-CD]為溶液中環(huán)糊精的平衡濃度；[β-CD-DES]為包合物的平衡濃度。計(jì)算不同溫度條件下[β-CD-DES]包合物的結(jié)合常數(shù)，結(jié)果見表1。

由表1可見，求得的結(jié)合常數(shù)較大，且隨溫度升高而增大，說明β-CD包合DES生成穩(wěn)定復(fù)合物。

3.6 DES與β-CD包合反應(yīng)熱力學(xué)函數(shù) 根據(jù)熱力學(xué)公式ΔG0=ΔH-TΔS0，ΔG0=-RTlnK結(jié)合van′t Hoff公式，由結(jié)合常數(shù)的對(duì)數(shù)值lnK對(duì)溫度的倒數(shù)1/T作圖，可得出不同溫度下的熱力學(xué)函數(shù)，結(jié)果見表2。van′t Hoff公式見下。

由表2可知，吉布斯自由能G0

3.7 包合物的偏振度及各向異性 偏振熒光是熒光分子在偏振光激發(fā)下發(fā)射光發(fā)生變化的偏振光譜。通常用偏振度P和各向異性r表示。

式中G為校正因子（G=IHV /IHH），IHV和IHH分別為水平偏振光激發(fā)下的垂直偏振發(fā)射光強(qiáng)度和水平偏振發(fā)射光強(qiáng)度，IVV和IVH分別為垂直偏振光激發(fā)下的垂直偏振的發(fā)射光強(qiáng)度和水平的發(fā)射光強(qiáng)度，P和r的計(jì)算結(jié)果見表3。

熒光體的轉(zhuǎn)動(dòng)速度與偏振度P成正比，偏振度越小，熒光體轉(zhuǎn)動(dòng)速度越快。由表3可見，β-CD-DES（物理混合）的偏振度P及各向異性r與β-CD相比，幾乎沒有發(fā)生改變。而β-CD-DES包合物的P及r較β-CD均有較為明顯的提高（分別提高了0.030，0.042）。說明β-CD-DES包合物由于藥物嵌入環(huán)糊精空腔內(nèi)，分子間相互作用使超分子體系穩(wěn)定性增強(qiáng)，復(fù)合物體積變大，熒光體轉(zhuǎn)動(dòng)速度變緩，體系黏度增大而使偏振度增大。偏振熒光法定量證明了β-CD-DES包合物的形成。

3.8 DES與β-CD包結(jié)物的結(jié)構(gòu)推測(cè) 研究證明分子結(jié)構(gòu)是藥物與β-CD相互作用的重要因素。DES具有2個(gè)疏水苯環(huán)，雖然分子的空間位阻不大，但要完整的包合藥物小分子，客體分子所需的空間會(huì)超出單個(gè)環(huán)糊精分子的容納空腔。由Hilde- brand-Benesi方程，1/（F-F0）對(duì)1/[β-CD]2呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，得出主客體包結(jié)比為2∶1，推測(cè)包結(jié)過程見圖6，可能的結(jié)合形式有4種。

β-CD分子的小口端由7個(gè)伯羥基組成，大口端由葡萄糖單元2，3位的14個(gè)仲羥基組成。由于氫鍵作用環(huán)糊精分子排列成“籠狀”或“管狀”，客體分子被包埋其中，可能有以下4種不同構(gòu)型：脫氧土大黃苷分子大頭（含葡萄糖基與酚羥基）插入β-CD的小口端，小頭（含甲氧基苯環(huán)）插入β-CD的大口端（圖6A）；脫氧土大黃苷分子大頭插入β-CD的大口端，小頭插入β-CD的小口端（圖6B）；脫氧土大黃苷分子大頭插入β-CD的大口端，小頭插入β-CD的小口端（圖6C）；脫氧土大黃苷分子大頭插入β-CD的小口端，小頭插入β-CD的小口端（圖6D）。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)成功制備脫氧土大黃苷-β-環(huán)糊精包合物，通過光譜試驗(yàn)結(jié)合理論計(jì)算方法對(duì)包合物超分子體系進(jìn)行深入探討，得到包合物熱力學(xué)函數(shù)及主客體包結(jié)比，氫鍵、范德華力為β-CD-DES包合物主要驅(qū)動(dòng)力。試驗(yàn)數(shù)據(jù)說明，包合反應(yīng)自發(fā)進(jìn)行，包合物形成后體系的能量降低，生成穩(wěn)定包合物超分子體系，藥物的熱穩(wěn)定性及溶解性能均有明顯提高，達(dá)到了預(yù)期效果。

另外，結(jié)合藥物及載體空間構(gòu)型，本研究推測(cè)出β-CD包合DES的4種類型，理論分析了包合反應(yīng)的可行性。由于本實(shí)驗(yàn)室的量子化學(xué)計(jì)算資源有限，包合物的穩(wěn)定構(gòu)型有待進(jìn)一步深入研究，但已開展的研究工作對(duì)環(huán)糊精-藥物包合物體系中分子間相互作用作了一定程度的探討，可為脫氧土大黃苷在醫(yī)藥方面的應(yīng)用提供有關(guān)參考。

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Study on preparation of deoxyrhaponti-β-cyclodextrin super-molecular

inclusion complex and performance of inclusion complex

GUO Ming*， WANG Chun-ge， YIN Xin-xin， DU Hong-chen

（School of Engineering， Zhejiang Agriculture & Forestry University， Lin′an 311300， China）

篇（6）

[中圖分類號(hào)] R541.78 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701（2009）13-38-02

The Brain Protective Effect of Different Dose Edaravone by Ear Intravenous Injection in CPR Rabbits

LIU Lin1 CAO Huanjun1 ZHANG Chengming1，2

1.Department of Anesthesiology，Weifang Medical College；2.The Department of Anesthesia，Weifang Medical College Affiliated Hospital，Shandong 261042

[Abstract] ObjectiveTo investigate the effect of edaravone on brain in the rabbits by cardiopulmonary resuscitation. Methods30 rabbits were randomly divided into three groups：NS，low-dose edaravone-treated and high-dose edaravone-treated groups. Each group had 10 animals. The contents of SOD and MDA in serum were assessed 30min，2h，4h after the cardiopulmonary cerebral models were established. ResultsCompared with the NS group，serum SOD in edaravone groups were significantly higher，but serum MDA in edaravone groups were significantly lower；Compared with group S，the serum SOD in group H was significantly higher，serum MDA of group H was significantly lower. ConclusionEdaravone has protective effect on brain in the rabbits after cardiopulmonary resuscitation，especially the high dose.

[Key Words]Edaravone； Cardiopulmonary resuscitation； Brain protection； MDA； SOD

心肺復(fù)蘇是危重疾病的搶救和治療過程中經(jīng)常遇到的問題，復(fù)蘇成功后由于長(zhǎng)時(shí)間的缺血缺氧，腦組織可能造成不同程度的損傷。目前認(rèn)為缺血再灌注后氧自由基增多是導(dǎo)致腦損傷加重的主要原因[1]，而超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）等是反映氧自由基水平的主要觀察指標(biāo)。依達(dá)拉奉（3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮）是新一類羥自由基清除劑，臨床上主要用于腦梗死的治療。各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，依達(dá)拉奉對(duì)缺血性腦損傷有保護(hù)作用[2，3]，能改善缺血性腦損傷患者神經(jīng)功能的預(yù)后。本實(shí)驗(yàn)擬通過檢測(cè)家兔血清SOD、MDA水平的變化，旨在評(píng)價(jià)不同劑量的依達(dá)拉奉液對(duì)心肺復(fù)蘇后家兔腦組織的保護(hù)作用，為臨床提供參考。

1 材料與方法

1.1 試劑與器材

（1）主要試劑：超氧化物歧化酶（SOD）測(cè)定試劑盒（南京建成生物工程研究所）；丙二醛（MDA）測(cè)定試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

（2）儀器：微量注射器（寧波市三愛儀器廠）；4°離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；722s分光光度計(jì)（上海精科公司）；DW-2000動(dòng)物呼吸機(jī)（上海嘉鵬科技有限公司）；PM- 9000便攜式多參數(shù)監(jiān)護(hù)儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

5月齡健康家兔30只，雌雄不拘，體重（2.50±0.30）kg，由濰坊醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用隨機(jī)數(shù)字表法分為3組：生理鹽水組（N組）、小劑量依達(dá)拉奉組（L組）、大劑量依達(dá)拉奉組（H組），每組10只。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物模型制作 心肺腦復(fù)蘇動(dòng)物模型的制作參照文獻(xiàn)[4，5]進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)前禁食12h，耳緣靜脈推注氯胺酮10mg/kg誘導(dǎo)，氯胺酮100mg加入250mL林格氏液內(nèi)靜脈輸注維持麻醉，保持家兔肢體無(wú)體動(dòng)，呼吸、心率平穩(wěn)。環(huán)甲膜做T形切口，插入氣管導(dǎo)管，接上動(dòng)物呼吸機(jī)行機(jī)械通氣。分離胸前皮膚，打開胸腔，暴露心臟。直流電約20mA，正極在右心房，負(fù)極在左心室，行電刺激誘發(fā)室顫，直至有創(chuàng)血壓低于30mmHg，維持5min。手法心肺復(fù)蘇，直至有創(chuàng)血壓高于60mmHg，且能穩(wěn)定維持為復(fù)蘇成功。另從右側(cè)耳緣靜脈泵入相應(yīng)干預(yù)藥物。

1.3.2 給藥劑量 本實(shí)驗(yàn)采用2種給藥劑量，即耳緣靜脈持續(xù)泵入依達(dá)拉奉液（由江蘇先聲藥業(yè)有限公司提供）1mg/（kg?h）， 3mg/（kg?h），對(duì)照組給予適量生理鹽水。

1.3.3 血清SOD、MDA含量測(cè)定 復(fù)蘇后30min、2h、4h分別抽取左側(cè)頸靜脈血液3mL，6h內(nèi)離心（3000r/min）15min后棄去下層，取上層血清測(cè)定SOD、MDA含量。血清SOD含量測(cè)定采用黃嘌呤氧化酶法。血清MDA含量測(cè)定采用硫代巴比妥酸法。以上嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所測(cè)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（χ±s）表示，采用SPSS13.0分析系統(tǒng)對(duì)定量數(shù)據(jù)進(jìn)行組間t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 血清SOD含量比較

與N組比較，H組血清SOD含量明顯升高，差異有顯著性（P＜0.05）；L組SOD含量開始升高不明顯，但隨著時(shí)間的延長(zhǎng)也顯著升高。與L組比較，H組血清SOD含量明顯升高（表1）。

2.2 血清MDA含量比較

與N組比較，L組與H組血清MDA含量開始雖然降低，但差異無(wú)顯著（P＞0.05）。隨著時(shí)間的增加，H組血清MDA含量明顯降低，差異有顯著性（P＜0.05），L組MDA含量也顯著降低（P＜0.05）。與L組比較，H組血清MDA含量明顯降低（表2）。

3 討論

心肺復(fù)蘇后引起的一系列病理生理變化均可導(dǎo)致復(fù)蘇后全身性炎癥反應(yīng)綜合征，繼而發(fā)生多臟器功能障礙綜合征，直接影響著復(fù)蘇的預(yù)后。腦組織較其他臟器更易遭受缺血缺氧性損害，復(fù)蘇后存在腦損傷、腦缺血缺氧等病理情況以及體內(nèi)酶系統(tǒng)保護(hù)作用減弱，氧自由基生成過多。腦內(nèi)產(chǎn)生的大量氧自由基通過脂質(zhì)過氧化作用及與膜蛋白的反應(yīng)造成腦細(xì)胞、血腦屏障的過氧損傷，導(dǎo)致細(xì)胞毒性、血管源性腦水腫，加劇腦的繼發(fā)性損害。

監(jiān)測(cè)血清SOD、MDA水平對(duì)研究心肺腦復(fù)蘇后缺血缺氧情況有重要意義。SOD作為內(nèi)源性氧自由基清除劑的代表，其活力在一定程度上反映了內(nèi)源性氧自由基的清除活力，大量SOD對(duì)缺氧缺血性腦損傷有明顯保護(hù)作用[6]。MDA是自由基與生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的代謝產(chǎn)物，代表氧自由基的含量，測(cè)定MDA含量可以反映出組織含有氧自由基的多少[7]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：H組血清SOD含量明顯升高，L組血清SOD含量升高不如H組明顯，說明大劑量依達(dá)拉奉治療產(chǎn)生的大量SOD對(duì)心肺復(fù)蘇后的腦保護(hù)作用顯著。依達(dá)拉奉治療后血清MDA含量明顯降低，說明氧自由基含量明顯減少，從而減輕腦損傷。

依達(dá)拉奉是親脂性基團(tuán)，對(duì)血腦屏障的通透率為60%。作為一種新型自由基清除劑，它通過提供一個(gè)電子給自由基，從而清除體內(nèi)活性氧分子，抑制脂質(zhì)過氧化[8]，同時(shí)也保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，抑制遲發(fā)性神經(jīng)細(xì)胞死亡，從而減輕神經(jīng)細(xì)胞損傷[9]。

目前依達(dá)拉奉已廣泛用于臨床治療缺血性腦血管病，通過清除自由基，抑制黃嘌呤氧化酶和次黃嘌呤氧化酶的活性，降低羥自由基的濃度，減輕腦損傷，對(duì)缺血的腦組織發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。結(jié)果證實(shí)，心肺復(fù)蘇后靜脈注射依達(dá)拉奉液對(duì)心肺復(fù)蘇后家兔有一定腦保護(hù)作用，且呈劑量依賴關(guān)系，為其在心肺復(fù)蘇后對(duì)患者臨床治療中的應(yīng)用提供了理論依據(jù)。

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篇（7）

一、“突破遼西北”戰(zhàn)略中生態(tài)環(huán)境保護(hù)的地位分析

2015年2月3日，《遼寧省人民政府關(guān)于進(jìn)一步深入實(shí)施突破遼西北戰(zhàn)略的意見》出臺(tái)并再次強(qiáng)調(diào)，“十三五”期間，推進(jìn)生態(tài)環(huán)境保護(hù)，著力實(shí)現(xiàn)綠色發(fā)展是突破遼西北戰(zhàn)略的重點(diǎn)任務(wù)之一。

在實(shí)施“突破遼西北”戰(zhàn)略過程中，要正視資源環(huán)境承載力。加強(qiáng)環(huán)境保護(hù)和生態(tài)建設(shè)，是突破遼西北區(qū)域發(fā)展戰(zhàn)略的重要保障。

二、遼西北農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)法律制度體系方面存在的問題

遼西北地區(qū)長(zhǎng)期以來(lái)工業(yè)發(fā)展相對(duì)緩慢，再加上該區(qū)域農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)的粗放經(jīng)營(yíng)導(dǎo)致水土流失、土地沙化、水資源浪費(fèi)等生態(tài)破壞加劇，資源環(huán)境承載力極其脆弱。脆弱的生態(tài)環(huán)境極大地制約該地區(qū)的經(jīng)濟(jì)社會(huì)發(fā)展。遼西北地區(qū)農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)法律制度體系方面存在的問題，主要表現(xiàn)為：

1、在立法上，農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)法律體系不健全。《中華人民共和國(guó)環(huán)境保護(hù)法》為主體的環(huán)境保護(hù)法律體系雖已初步建立，但其對(duì)農(nóng)業(yè)環(huán)境保護(hù)的規(guī)定缺乏，使得許多農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)工作難以開展。

2、在執(zhí)法層面，執(zhí)法手段和措施單一。農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)領(lǐng)域統(tǒng)分結(jié)合的分層管理體制效率低下，且極易導(dǎo)致各執(zhí)法部門互相推諉和爭(zhēng)權(quán)奪利現(xiàn)象產(chǎn)生。農(nóng)業(yè)主管部門和環(huán)保部門都可以行使行政執(zhí)法權(quán)，加之地方保護(hù)主義導(dǎo)致的執(zhí)法不嚴(yán)、違法不究等違法失職現(xiàn)象，使得農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)陷入一個(gè)異?；靵y和尷尬的局面。

3、在運(yùn)營(yíng)環(huán)境上，相關(guān)制度協(xié)調(diào)性較差。許多生態(tài)環(huán)境法律制度雖已建立，但制度之間的配套性和協(xié)調(diào)性較差。在有關(guān)農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)方面，缺乏必要的制度保障，如土壤污染防治、農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)公益訴訟制度等。

4、在法律歸責(zé)上，涉及生態(tài)環(huán)境保護(hù)的禁止性規(guī)定與法律責(zé)任規(guī)定不協(xié)調(diào)，法律責(zé)任規(guī)定相對(duì)較為寬泛不夠嚴(yán)苛，使得現(xiàn)行環(huán)境保護(hù)法律法規(guī)既不足以震懾違法的當(dāng)事人，也不能發(fā)揮應(yīng)有的警示作用。

5、在法律監(jiān)督上，相關(guān)部門認(rèn)識(shí)，行政管理手段單一，過分偏于經(jīng)濟(jì)處罰，缺乏對(duì)于建立長(zhǎng)遠(yuǎn)有效的法律監(jiān)督機(jī)制的重視，致使農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境遭到破壞，嚴(yán)重威脅當(dāng)?shù)剞r(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)社會(huì)的可持續(xù)發(fā)展。

三、完善遼西北農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)法律體系的建議

遼西北生態(tài)環(huán)境保護(hù)法律體系所存在的問題使得改善該區(qū)域農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境顯得尤為重要。只有完善農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)法律體系，才能更好的發(fā)展遼西北地區(qū)的農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)，走可持續(xù)發(fā)展道路。

1、制定統(tǒng)一的農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)法

面對(duì)遼西北地區(qū)農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境的困境，應(yīng)制定統(tǒng)一的《農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)法》，以法律文件的形式規(guī)范對(duì)于農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境管理;通過對(duì)現(xiàn)行環(huán)保法的修訂，完善對(duì)于農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)的專項(xiàng)規(guī)定。

2、強(qiáng)化農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)執(zhí)法力度

“天下之事不難于立法，而難于法之必行?！盵1]在農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)領(lǐng)域，建立垂直管理體制，以求增強(qiáng)管理和執(zhí)法效率，避免部門間相互推諉和扯皮的現(xiàn)象的發(fā)生。通過賦予農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)管理部門較多的行政許可、行政強(qiáng)制和行政處罰權(quán)，來(lái)增強(qiáng)其執(zhí)法和管理權(quán)威;此外，應(yīng)嚴(yán)厲打擊地方保護(hù)主義，嚴(yán)格執(zhí)法，對(duì)危害農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境的違法犯罪行為，加大行政和司法打擊力度，加強(qiáng)執(zhí)法和司法保護(hù)。

3、明確農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境違法行為的法律責(zé)任

農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)中“無(wú)法可依”的現(xiàn)象層出不窮。因此，農(nóng)業(yè)環(huán)境保護(hù)法必須對(duì)污染和破壞農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境的行為作出相應(yīng)的處罰規(guī)定，加大處罰力度，完善相關(guān)處罰指標(biāo)體系，從重從嚴(yán)處理相關(guān)違法行為，保證農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)管理工作的有序運(yùn)行開展。

4、采用統(tǒng)一監(jiān)督管理與分工負(fù)責(zé)相結(jié)合的農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)監(jiān)督管理體制

信息不公開、不對(duì)稱是妨礙公眾參與環(huán)境保護(hù)工作的重要根源。要不斷完善農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境信息公開立法，積極構(gòu)建我國(guó)農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境公開法律體系?！白寵?quán)力在陽(yáng)光下行使”，才能使得我國(guó)農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)工作在公眾的參與下得到有效監(jiān)督。

結(jié)語(yǔ)

“突破遼西北”戰(zhàn)略有利于提升全省經(jīng)濟(jì)整體實(shí)力，促進(jìn)區(qū)域發(fā)展，也踐行國(guó)家政策。因此，在這一過程中，要高度重視農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境的保護(hù)工作，為經(jīng)濟(jì)社會(huì)的持續(xù)健康可持續(xù)發(fā)展提供十足的動(dòng)力。（作者單位：沈陽(yáng)師范大學(xué)法學(xué)院）

參考文獻(xiàn)：

[1] 陳葉蘭.論農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)的良法之治.求索.2008.

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[4] 汪志革.農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境保護(hù)的對(duì)策研究..科技資訊.2010（16）.

篇（8）

【關(guān)鍵詞】  槲寄生生物堿；P53；RT-PCR；人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721

   

Abstract  Objective：To examine the effects of mistletoe alkali on P53 expression in Human Hepatocarcinoma cell SMMC-7721. Methods:MTT assay was used to evaluate the inhibitory effects of mistletoe alkali on the proliferation of human Hepatocarcinoma cell SMMC-7721. RT-polymerase chain reaction (RT-PCR) technique was used to evaluate P53 mRNA expression in human Hepatocarcinoma cell SMMC-7721. Results:Mistletoe alkali significantly inhibits the growth of SMMC-7721 cells in a time and dose-dependent manner. After exposure of SMMC-7721 cells with mistletoe alkali at 0.100mg/mL for 24 hours, the relative intensity of P53 mRNA expression level as determined by RT-PCR increases markedly (P＜0.01). Conclusion:The stimulation of the expression of anti-oncogene P53 by mistletoe alkali may underlie the molecular basis for it to inhibit tumor growth

  

Key words  Mistletoe alkali； P53; RT-PCR； Human hepatocarcinoma cell line SMMC-7721

原發(fā)性肝癌是我國(guó)常見的惡性腫瘤之一，其死亡率居惡性腫瘤的第二位[1]，且原發(fā)性肝癌具有起病隱匿、進(jìn)展迅速、高度惡性、易轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)、治療難度大、生存期短等特點(diǎn)，被稱為“癌中之王”[2]。目前肝癌以外科手術(shù)為首選治療方案，但術(shù)后5年生存率并不理想，總體只有62.9%，大肝癌術(shù)后5年生存率僅34.6%。近年來(lái)應(yīng)用傳統(tǒng)的中藥治療日益受到重視。槲寄生為桑寄生科植物槲寄生［Viscum coloratum(Komar)Nakai］的干燥帶葉莖枝，其味苦、平，歸肝、腎經(jīng)，有祛風(fēng)濕、補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、安胎作用[3] ，且槲寄生有較好的抗腫瘤效果[4] 。本文從分子水平探討槲寄生抑制肝癌的機(jī)制。

1  材料與方法

在哪

1.1  材料

1.1.1  細(xì)胞株  人肝癌細(xì)胞SMMC-7721，購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞研究所。

1.1.2  主要試劑和儀器  RPMI1640(GIBCO)，胎牛血清(杭州四季青公司)，二甲基亞砜、MTT(Amersco)，RNA提取試劑盒、RT-PCR試劑盒（寶生物公司），瓊脂糖（Promega），引物（上海生工）、Forma CO2培養(yǎng)箱（美國(guó)），ELX-800酶標(biāo)儀（美國(guó)），Enpddorf低溫離心機(jī)（德國(guó)），PCR儀(美國(guó))，紫外分光光度計(jì)（日立），倒置顯微鏡、凝膠成像系統(tǒng)（上?？禈罚?。

1.1.3  藥物  槲寄生購(gòu)于包頭益仁堂中藥房，山西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)系揚(yáng)官娥教授鑒定該中藥為槲寄生并非其他寄生。槲寄生生物堿由本?；瘜W(xué)教研室予以提取。將提取物以碘-碘化鉀試劑、碘化汞鉀試劑檢驗(yàn)呈陽(yáng)性反應(yīng)，證明提取物為槲寄生生物堿。

1.2  方法

1.2.1  體外細(xì)胞培養(yǎng)  細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清、100mg/L青霉素、100mg/L鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基中, 37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每2天換液1次。

1.2.2  MTT法測(cè)定槲寄生生物堿對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響  取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的肝癌細(xì)胞調(diào)整至1×105/mL，取0.200mL接種于96孔板，置37 ℃、5%CO2培養(yǎng)24h后棄原培養(yǎng)液,加入濃度為0.200mg/mL、0.100mg/mL、0.050mg/mL、0.025mg/mL槲寄生堿培養(yǎng)液各0.200mL，每個(gè)濃度設(shè)6個(gè)復(fù)孔，分5次重復(fù)，并設(shè)陰性對(duì)照、5-Fu陽(yáng)性對(duì)照（10μg/mL）和空白對(duì)照孔，同時(shí)作3個(gè)板。分別作用 24h、48h、72h后傾去上清液,用D-Hanks洗滌2次，各孔加入5%MTT 0.020mL，37℃4h后吸去上清液,加入DMSO 0.150mL,振蕩10min使結(jié)晶充分溶解后上酶標(biāo)儀490nm處測(cè)吸光度A值。抑制率(%)=(對(duì)照孔A值-實(shí)驗(yàn)組A值)/對(duì)照孔A值×100 %。依據(jù)MTT結(jié)果用改良寇氏法計(jì)算IC50。

1.2.3  槲寄生生物堿對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721P53 mRNA表達(dá)影響的測(cè)定  （1）細(xì)胞給藥：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SMMC- 7721細(xì)胞調(diào)整至2×105/ mL,2.500mL接種于6孔板,置37℃、5 %CO2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24h后棄原培養(yǎng)液,對(duì)照組加入不含藥物的培養(yǎng)基2.500mL，試驗(yàn)組依據(jù)MTT結(jié)果加入含濃度為0.100mg/mL槲寄生生物堿培養(yǎng)液2.500mL培養(yǎng)24h(抑制率為38%)。（2）總RNA的提取：用RNAiso Reagent提取試劑,經(jīng)氯仿抽提、異丙醇沉淀，分別提取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞總RNA。提取的總RNA用紫外分光光度計(jì)在260nm和280nm下檢測(cè)其吸光度值，以A260nm/A280nm比值表示其純度。（3）引物設(shè)計(jì)：參考文獻(xiàn)[5-6] 及GenBank中基因序列設(shè)計(jì)引物。P53上游引物：5′-TGTCCCCGGACGATATTGAAC-3′，下游引物：5′ -TTCCTTCCACTCGGATAAGATGC-3′；β-actin上游引物：5′-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3′，下游引物：5′-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3′。（4）RT-PCR反應(yīng)：逆轉(zhuǎn)錄取總RNA 1μL按反轉(zhuǎn)錄試劑盒要求配成10μL反應(yīng)體系，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分別進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄PCR反應(yīng)。轉(zhuǎn)錄條件為30℃ 10min、50℃ 20min、99℃ 5min、5℃ 5min，共一個(gè)循環(huán)。（5）PCR反應(yīng)：β-actin擴(kuò)增條件: 94℃預(yù)變性2min，94℃ 30s，55℃ 30s，72℃ 1min，35個(gè)循環(huán),72℃延伸8min。P53擴(kuò)增條件：94℃預(yù)變性2min，94℃30s，56℃30s,72℃1min,35個(gè)循環(huán),72℃延伸8min。

1.2.4  半定量分析  將擴(kuò)增的RT-PCR產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠中電泳45min。電泳結(jié)束后在紫外透射儀下觀察電泳條帶,于凝膠成相儀上進(jìn)行目的條帶的密度定量,以目的基因條帶的密度與內(nèi)參β- actin的密度之比作為該目的基因的mRNA的相對(duì)含量。

1.2.5  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理  實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件處理，數(shù)據(jù)用x±s表示，行t檢驗(yàn),以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2  結(jié)果在哪

2.1  槲寄生生物堿對(duì)細(xì)胞增殖的影響  槲寄生生物堿對(duì)SMMC-7721細(xì)胞有顯著生長(zhǎng)抑制作用，且呈劑量和時(shí)間依賴方式，0.100mg/mL和0.200mg/mL濃度組在24h、 48h、72h均表現(xiàn)出抑制SMMC-7721細(xì)胞生長(zhǎng)作用，抑制率分別為38%、52%、75%和52%、74%、93%，且作用強(qiáng)于5-Fu。 0.050mg/mL組及0.025mg/mL組也表現(xiàn)出抑制SMMC-7721細(xì)胞生長(zhǎng)作用，在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)抑制率分別為9%、21%、49%和0%、5 %、23%，但作用弱于5-Fu。

2.2  RT-PCR結(jié)果

2.2.1  總RNA抽提結(jié)果  所提取RNA經(jīng)紫外分光光度計(jì)檢測(cè)A260nm/A280nm比值為1.8，說明提取的樣品為較純的RNA。

2.2.2  槲寄生生物堿對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721 P53 mRNA表達(dá)的影響  0.100mg/mL槲寄生生物堿作用24h后能增強(qiáng)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721 P53 mRNA表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。電泳及P53 mRNA/β-actin mRNA半定量見圖1及表1。

圖1  槲寄生堿對(duì)肝癌SMMC-7721細(xì)胞P53 mRNA表達(dá)的影響（略）

M為Marker，1、3為對(duì)照組，2、4為藥物組，1、2為P53，3、4為β-actin內(nèi)對(duì)照

表1  槲寄生堿對(duì)肝癌SMMC-7721細(xì)胞P53 mRNA表達(dá)的影響（略）

*與對(duì)照組比較P<0.01

3  討論在哪

  

槲寄生是我國(guó)傳統(tǒng)中藥，分布廣泛，在我國(guó)主要分布在東北、華北地區(qū)，資源豐富。為了開發(fā)利用天然資源，國(guó)內(nèi)外的學(xué)者作了大量的工作。目前證實(shí)槲寄生有抗腫瘤、抗病毒、抗菌、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗衰老等作用。目前研究較多的是槲寄生苷類的結(jié)構(gòu)及槲寄生毒肽的抗腫瘤作用，對(duì)生物堿的研究不多。彭海燕等[7]的研究表明槲寄生生物堿在120mg/kg計(jì)量時(shí)對(duì)小鼠肝癌H22 的抑瘤率可達(dá)73.8%。腫瘤抑制基因是腫瘤遺傳學(xué)及分子生物學(xué)的研究熱點(diǎn)。P53基因與腫瘤關(guān)系最為密切。野生型的P53基因產(chǎn)物監(jiān)控基因組的完整性，當(dāng)DNA受到損傷時(shí)，野生型P53產(chǎn)物通過轉(zhuǎn)譯后的穩(wěn)定作用，蓄積、促進(jìn)細(xì)胞周期停留在G1期，用這額外的時(shí)間進(jìn)行修復(fù)[8]。野生型P53基因的結(jié)構(gòu)和表達(dá)異常是肝癌中最多的基因改變之一[9]。

  

本實(shí)驗(yàn)從分子水平探討槲寄生生物堿的作用機(jī)理與基因表達(dá)的關(guān)系。我們選擇了與腫瘤發(fā)生關(guān)系密切的基因P53作為研究對(duì)象，檢測(cè)其mRNA的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，槲寄生生物堿0.100mg/mL作用于肝癌細(xì)胞株SMMC-7721 24h后，野生型P53表達(dá)增強(qiáng)。這表明槲寄生生物堿可能激活抑癌基因P53而使癌細(xì)胞死亡從而發(fā)揮其抗腫瘤作用。對(duì)于槲寄生生物堿作用后其他濃度及時(shí)間點(diǎn)基因表達(dá)的改變有待繼續(xù)研究。

【參考文獻(xiàn)】

 

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篇（9）

【關(guān)鍵詞】 金絲桃素　慢性高眼壓　視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞　神經(jīng)保護(hù)　兔

The histology observation on the protective effect of hypericin on retinal ganglion cell in chronic ocular hypertension rabbits

Abstract AIM: To explore the effect of hypericin on retinal ganglion cell in chronic ocular hypertension rabbits. METHODS: Twenty rabbits were used to build chronic ocular hypertension model by posterior chamber injection of alpha-chymotrypsin. Ten days after successful model creation， hypericin 0.1mL or saline 0.1mL was injected into the vitreous cavity once a week for 2 weeks. Retinal ganglion cell of these eyes and that of four normal rabbit eyes were observed by light microscopy and electron microscopy. The thinckness of inner retina layer was examined.RESULTS: The number of retinal ganglion cell in saline-treated group decreased significantly. There was serious cell degradation with perinuclear condensation of chromatin and swelling organelles， but the change was slight in hypericin-treated group. The difference of the thickness of inner retina layer between the two groups was significant (P＜0.01).CONCLUSION: Intravitreal injection of hypericin as a protein kinase C antagonist can protect the retinal ganglion cell in chronic ocular hypertension rabbits.

· KEYWORDS: hypericin; chronic ocular hypertension; retina ganglion cell; nerve protection; rabbits

0引言

青光眼是一組與眼壓升高有關(guān)的致盲性眼病。它的病理基礎(chǔ)是視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞進(jìn)行性死亡。目前青光眼的治療主要是降眼壓，但是單純降眼壓并不能阻止視功能的繼續(xù)下降。隨著視神經(jīng)保護(hù)理論的提出和研究，視神經(jīng)保護(hù)治療越來(lái)越受到人們廣泛的關(guān)注[1]。我們就是基于視神經(jīng)保護(hù)治療的理論，探討一種蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）抑制劑——金絲桃素對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)作用。

1材料和方法

1.1材料 健康成年家兔24只，體質(zhì)量2.0~2.5kg，無(wú)眼疾，雌雄兼用，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。金絲桃素和二甲基亞砜(sigma公司)、注射用糜蛋白酶（上海第一生化藥業(yè)有限公司）、LZL-12型手術(shù)顯微鏡（鎮(zhèn)江中天光學(xué)儀器有限責(zé)任公司）、Tonopen筆式眼壓計(jì)（Medtronic Solan公司）。

1.2方法 健康成年家兔24只，隨機(jī)挑選20只作為實(shí)驗(yàn)組，另4只作為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組用200g/L烏拉坦5mL/kg，3min內(nèi)注入耳緣靜脈全身麻醉，每只兔隨機(jī)選一眼作實(shí)驗(yàn)眼，的卡因點(diǎn)眼局部麻醉。用1mL注射器抽取400U 糜蛋白酶溶液0.2mL，從顳側(cè)角鞏膜緣進(jìn)針，經(jīng)瞳孔至對(duì)側(cè)虹膜下注入后房，四環(huán)素眼膏涂眼。每日用Tonopen眼壓計(jì)測(cè)眼壓，眼壓在30mmHg（1mmHg=0.133kPa）以上為慢性高眼壓造模成功[2]。待高眼壓模型眼壓穩(wěn)定升高10d后，隨機(jī)挑選半數(shù)的高眼壓兔作玻璃體內(nèi)金絲桃素注射。金絲桃素用二甲基亞砜溶解，生理鹽水稀釋，終濃度為2μmol/L， 避光保存。實(shí)驗(yàn)兔烏拉坦全身麻醉加的卡因局部麻醉，在顯微鏡下用2mL注射器，從12點(diǎn)鐘角膜緣后3mm處睫狀體平坦部進(jìn)針，抽出玻璃體0.1mL，注入金絲桃素0.1mL。1次/wk，連續(xù)2wk。另一半高眼壓兔同上法操作，玻璃體內(nèi)注入生理鹽水0.1mL。1次/wk，連續(xù)2wk。正常兔4只，不做任何眼部和全身的處理，處死后進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。第2次玻璃體注射后7d處死兔子，摘除眼球置于冰盒內(nèi)，迅速去除眼前段，暴露并分離視網(wǎng)膜分別制作光鏡電鏡標(biāo)本。光鏡標(biāo)本經(jīng)40g/L福爾馬林固定，乙醇梯度脫水，石蠟包埋切片，HE染色，光鏡觀察并照相[3]。電鏡標(biāo)本經(jīng)30g/L的戊二醛和10g/L的鋨酸固定，乙醇丙酮逐級(jí)脫水，環(huán)氧樹脂包埋，超薄切片，醋酸雙氧鈾檸檬酸鉛染色，電鏡觀察并照相[4]。觀察所有家兔視網(wǎng)膜光鏡下結(jié)構(gòu)的變化并利用定量病理學(xué)的網(wǎng)格系統(tǒng)[5]，按J=LP．∑Pb/∑IA+∑Ib，計(jì)算視網(wǎng)膜內(nèi)界膜至外核層內(nèi)側(cè)間的距離，以5次平均值(MTIRL)作為視網(wǎng)膜內(nèi)層平均厚度[6]。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:應(yīng)用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果用 表示

2結(jié)果

我們采用后房注射α－糜蛋白酶的方法制備兔慢性高眼壓模型。此方法高眼壓發(fā)生快、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)、眼壓穩(wěn)定。采用20只兔作為實(shí)驗(yàn)組造模，最終16只成功，其中一只因麻醉過量死亡，3眼壓未達(dá)到預(yù)期水平，成功率為80%。造模后眼壓一般在術(shù)后1wk內(nèi)升高，實(shí)驗(yàn)眼呈牛眼狀外觀，眼球變硬，睫狀充血，角膜水腫，前房加深，瞳孔散大。Tonopen筆式眼壓計(jì)測(cè)得平均眼壓為(34.12±2.31) mmHg，高眼壓狀態(tài)至少可維持2mo。

2.1光鏡觀察 光鏡下見正常兔的視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)清晰、完整，可觀察到10層結(jié)構(gòu)，外核層細(xì)胞數(shù)量最多，內(nèi)核層細(xì)胞數(shù)量較少，節(jié)細(xì)胞為單層，形態(tài)呈類圓形（圖1A）。生理鹽水對(duì)照組視網(wǎng)膜內(nèi)層變薄，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量明顯減少，細(xì)胞出現(xiàn)變性，內(nèi)、外核層細(xì)胞排列稀疏，數(shù)量減少（圖1B）。金絲桃素治療組損傷明顯輕于生理鹽水對(duì)照組，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量有所減少，胞核大部分存在，部分出現(xiàn)空泡樣變，內(nèi)核層和外核層結(jié)構(gòu)與正常組所見相似（圖1 C）。

2.2電鏡觀察 透射電鏡下見正常視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞核呈類圓形，染色質(zhì)顏色清晰，分布均勻，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等細(xì)胞器形態(tài)正常，細(xì)胞膜完整(圖2A) 。生理鹽水對(duì)照組神經(jīng)節(jié)細(xì)胞明顯減少，部分細(xì)胞嚴(yán)重變性，核結(jié)構(gòu)稀疏，核仁固縮及偏位，胞質(zhì)染色質(zhì)邊集，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹，線粒體腫脹，嵴消失，空泡變性（圖2B）。金絲桃素治療組見部分核稍有變形，核染色質(zhì)略顯稀疏，顏色稍淡，線粒體空泡變性，殘存線粒體嵴， 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)僅見輕度腫脹（圖2C）。視網(wǎng)膜內(nèi)層平均厚度正常組為78.62±1.87μm， 金絲桃素治療組為73.80±5.61μm， 生理鹽水對(duì)照組為59.30±2.17μm。后兩者相比有顯著性差異(P＜0.01)。

圖 1 兔視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 (HE×200) A：空白對(duì)照組正常；B:生理鹽水對(duì)照組數(shù)量明顯減少，出現(xiàn)變性；C：金絲桃素治療組數(shù)量減少，胞核大部分存在

圖 2 兔視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)(TEM×106) A：空白對(duì)照組核居中，細(xì)胞器形態(tài)正常，細(xì)胞膜完整；B：生理鹽水對(duì)照組核仁固縮，胞質(zhì)染色質(zhì)邊集，線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器腫脹；C：金絲桃素治療組核染色質(zhì)濃集，線粒體空泡變性，殘存線粒體嵴

3 討論

在臨床上作為一種抗病毒藥、抗抑郁藥應(yīng)用的金絲桃素是一種PKC的特異性抑制劑，是從金絲桃家族中提取的一種紫色結(jié)晶顏料[7]。目前已經(jīng)有研究表明，金絲桃素對(duì)增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變也有治療作用[8]。通過本實(shí)驗(yàn)我們觀察到，應(yīng)用金絲桃素玻璃體內(nèi)注射，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)相比生理鹽水對(duì)照組損傷明顯減輕，視網(wǎng)膜內(nèi)層平均厚度也比生理鹽水對(duì)照組厚。這說明金絲桃素可以直接增強(qiáng)節(jié)細(xì)胞對(duì)抗有害因素的能力，促進(jìn)受損細(xì)胞的存活和功能恢復(fù)。

青光眼的主要危險(xiǎn)因素之一是病理性眼壓升高。慢性高眼壓對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷的機(jī)制主要是因?yàn)檠蹓荷咂仁购Y板組織變形，使得節(jié)細(xì)胞軸漿流受阻于篩板，由此引起逆行運(yùn)向神經(jīng)節(jié)細(xì)胞胞體的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)性因子減少，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞釋放谷氨酸，細(xì)胞外間隙谷氨酸蓄積，節(jié)細(xì)胞發(fā)生凋亡[9-12]。本實(shí)驗(yàn)中生理鹽水對(duì)照組節(jié)細(xì)胞數(shù)量明顯減少，部分嚴(yán)重變性， 核仁固縮，胞質(zhì)染色質(zhì)邊集，線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器腫脹就是細(xì)胞凋亡的早期表現(xiàn)。PKC是一類鈣、磷脂依賴性絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，它可以通過一系列信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)對(duì)谷氨酸受體和谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白進(jìn)行具有濃度和劑量依賴性的調(diào)節(jié)，使得細(xì)胞外間隙谷氨酸蓄積的同時(shí)，增強(qiáng)谷氨酸與其受體的作用，最終增加受體介導(dǎo)的興奮毒性，導(dǎo)致視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡[13，14]。反之，PKC抑制劑則可拮抗這一作用。我們已經(jīng)用實(shí)驗(yàn)證實(shí)了慢性高眼壓兔不同時(shí)間點(diǎn)的視網(wǎng)膜谷氨酸含量都比正常值有所升高，而PKC抑制劑金絲桃素能拮抗這一作用。金絲桃素對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞組織學(xué)的保護(hù)作用，很可能是通過PKC抑制劑對(duì)視網(wǎng)膜谷氨酸含量的抑制這一機(jī)制來(lái)實(shí)現(xiàn)的。當(dāng)然對(duì)于青光眼這種慢性疾病來(lái)說，反復(fù)玻璃體內(nèi)注射，也是有其明顯的不良后果的。因此，探討金絲桃素的作用和調(diào)控機(jī)制，研究如何發(fā)揮其對(duì)青光眼視神經(jīng)保護(hù)的治療潛力，有待于我們今后進(jìn)一步研究。

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篇（10）

What people wear glasses fast increase? The question in my mind kept wandering. Later, I looked at a very long time, also check the information from the Internet, finally reached the conclusion. The first big reason: no scientific methods to protect their eyes. Some classmates for a long period of time reading books, watching TV, Internet access, make the eye often is in a state of fatigue, and do not pay attention to eye health. Although our school asked the students are doing eye exercises on time, but part of the students or not to do a good job, some still hiding under the table. The second reason: genetic. Some parents are nearsighted, and pass on to their children. But this kind of situation seems to be not much, "small glasses," often because not sparing eyes.

Finally, counsels: we must cherish oneself only this pair of eyes, to make our every day is full of light!

眼睛是心靈的窗口，是獲得各種知識(shí)的重要途徑。生活中我們處處都離不開眼睛，如果沒有眼睛，世界將會(huì)變得一片黑暗，如果我們的眼睛出了問題，學(xué)習(xí)和生活將會(huì)遇到很多困難。盡管這樣，我們有很多人還是不愛惜眼睛。在我的周圍，已經(jīng)有越來(lái)越多的同學(xué)帶上了“小眼鏡兒”，我的視力也逐漸下降，后來(lái)被醫(yī)生診斷為假性近視。所以，保護(hù)眼睛這一點(diǎn)也被越來(lái)越多的人們重視起來(lái)。