序論：好文章的創(chuàng)作是一個(gè)不斷探索和完善的過程，我們?yōu)槟扑]十篇生物細(xì)胞分析范例，希望它們能助您一臂之力，提升您的閱讀品質(zhì)，帶來更深刻的閱讀感受。

篇（1）

采用Trypanblue拒染試驗(yàn)檢測凍存前及復(fù)蘇后細(xì)胞的存活率。將待檢細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，取細(xì)胞懸液與04％臺盼藍(lán)溶液以9∶1混合均勻（使臺盼藍(lán)溶液終濃度為004％），3min后觀察，并用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。鏡下觀察可見健康活細(xì)胞胞體完整、細(xì)胞透明、不著色，凡著色呈藍(lán)色者均為死細(xì)胞。計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞，計(jì)算細(xì)胞活率。

1.2生長曲線繪制

向24孔培養(yǎng)板每孔內(nèi)接種1mL密度約為1×104個(gè)／mL細(xì)胞，從接種之日算起，每隔24h計(jì)數(shù)2個(gè)孔內(nèi)的細(xì)胞密度，算出平均值，連續(xù)測定12d，以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以細(xì)胞密度為縱坐標(biāo)，繪制細(xì)胞生長曲線。

1.3細(xì)胞染色體分析

選取第4代生長良好的新生昆明犬成纖維細(xì)胞，按照常規(guī)方法［9］進(jìn)行染色體制片，Gimesa染色后選擇染色體分散與形態(tài)良好的分裂相在油鏡下觀察拍照，作核型圖，對50～100個(gè)分裂中期細(xì)胞進(jìn)行染色體數(shù)目統(tǒng)計(jì)。

2結(jié)果與分析

2.1細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察

新生昆明犬耳緣皮膚組織經(jīng)膠原酶分離培養(yǎng)3～4d后，鏡下觀察可見有少數(shù)細(xì)胞沿組織塊邊緣慢慢貼壁伸展，細(xì)胞形狀不規(guī)則，且其組織塊的生長暈形成時(shí)間較長。經(jīng)8～10d培養(yǎng)才出現(xiàn)大量成片生長的優(yōu)勢細(xì)胞，此時(shí)觀察細(xì)胞的形態(tài)呈長梭形、多角形或扁平星形，為典型的成纖維細(xì)胞形態(tài)。后再經(jīng)3～4d細(xì)胞生長至匯合，并長滿整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面（圖1A），此時(shí)可進(jìn)行傳代和凍存。傳代后的細(xì)胞生長旺盛，在形態(tài)上與原代細(xì)胞無明顯差異，經(jīng)2～3d即可長至近100％匯合，此時(shí)細(xì)胞呈放射狀或渦旋狀走勢（圖1B）。待傳代時(shí)，加入消化液后顯微鏡下可見細(xì)胞回縮，呈圓形（圖1C）。

2.2成纖維細(xì)胞凍存前和復(fù)蘇后的活

耳部成纖維細(xì)胞凍存前和復(fù)蘇后的活率分別為933％，908％（圖2）。凍存前與復(fù)蘇后的細(xì)胞存活率差異不顯著（P＞005），說明原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞生長狀態(tài)良好，培養(yǎng)條件適宜，且凍存和復(fù)蘇的過程對細(xì)胞活力狀況損害較小。

2.3生長曲線

根據(jù)昆明犬耳部成纖維細(xì)胞接種于24孔板連續(xù)培養(yǎng)12d的細(xì)胞計(jì)數(shù)情況，繪制出了成纖維細(xì)胞的生長曲線（圖3）。昆明犬耳部成纖維細(xì)胞的生長曲線呈典型的“S”形，即經(jīng)過了潛伏生長期、對數(shù)生長期、平臺期以及衰亡期。其表現(xiàn)為1～2d的潛伏生長期細(xì)胞總數(shù)基本保持不變，從第3天起，細(xì)胞數(shù)量開始增加，3～8d左右細(xì)胞明顯地進(jìn)入對數(shù)生長期，細(xì)胞數(shù)量快速增長，第8～9天，細(xì)胞由于缺乏足夠生長空間而增長放緩，開始進(jìn)入平臺期。第9天后，由于細(xì)胞數(shù)量的急劇增加、生長空間的極大限制，經(jīng)過短暫的平臺期后，細(xì)胞發(fā)生接觸抑制快速進(jìn)入衰亡期，細(xì)胞生長幾乎停止，隨后細(xì)胞逐漸脫落死亡，此時(shí)鏡下可見有大量凋亡細(xì)胞漂浮。由生長曲線上的數(shù)據(jù)分析，耳部成纖維細(xì)胞群體倍增時(shí)間約為32h。

2.4核型觀察分析

昆明犬耳部成纖維細(xì)胞中期染色體分裂相與核型分析如圖4所示：染色體數(shù)目2n＝78（XX）。計(jì)數(shù)80個(gè)4代細(xì)胞的染色體數(shù)目，總數(shù)2n＝78的細(xì)胞數(shù)約占總細(xì)胞數(shù)的90％，達(dá)到了建立細(xì)胞系75％～80％的要求，說明所建細(xì)胞系為穩(wěn)定的二倍體細(xì)胞系。39對染色體中有38對常染色體均為端著絲粒（T）染色體，長度逐漸遞減；性染色體X，Y均為中央著絲粒（M），X染色體的長度最大。

3討論

篇（2）

中圖分類號 S14 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-7731（2013）24-71-02

生物肥料是作物用肥的發(fā)展方向。根據(jù)產(chǎn)品介紹，“地福來”活性細(xì)胞肥，利用生物固氮，能為農(nóng)作物的整個(gè)生長周期提供所需的30%～50%的氮肥，即節(jié)約30%～50%的氮肥用量，作物施用這種“細(xì)胞肥”后，不僅能增加作物產(chǎn)量、縮短生長周期、提高品質(zhì)、減少化肥使用量、改良土壤，而且能夠增強(qiáng)作物抗逆性、抗病蟲害的能力。所以，2013年筆者在樅陽縣布置了3個(gè)水稻示范點(diǎn)。具體如下：

1 樅陽縣浮山示范點(diǎn)示范情況

1.1 示范目的 本次示范目的是在同等的施肥管理水平下，增加水稻產(chǎn)量。

1.2 示范地點(diǎn) 樅陽縣浮山鄉(xiāng)。

1.3 示范方法 對比法。

1.4 示范情況 栽培方式：育苗移栽；品種：優(yōu)Ⅰ402；用種量：2kg/667m2；4月5日播種，5月4日移栽，5月13日除草。分別于4月28日防治灰飛虱、稻薊馬；5月21日防治稻薊馬；6月20日防治稻苞蟲，紋枯病。

表1 浮山地福來生物細(xì)胞肥水稻施用示范基本情況

[示范品種＼&栽培方式＼&施用時(shí)間

（月/日）＼&用肥量

（mL/667m2）＼&施肥方式＼&優(yōu)Ⅰ402＼&秧田＼&4/18＼&200＼&噴霧＼&優(yōu)Ⅰ402＼&育苗移栽＼&5/24＼&200＼&噴霧＼&]

6月24日，示范田早稻正處抽孕穗期，平均莖蘗15.6個(gè)，對照平均莖蘗13.6個(gè)。預(yù)計(jì)抽穗比對照早7d左右。

1.5 7月22日，對浮山示范點(diǎn)進(jìn)行測產(chǎn)，結(jié)果如表2：

從表2可以看出，主要表現(xiàn)地福來大田專用肥示范田比對照田有效穗數(shù)多3.16萬/667m2，由于分蘗穗多，示范田平均穗粒數(shù)、結(jié)實(shí)率比對照田略低，經(jīng)計(jì)算產(chǎn)量結(jié)果得出，浮山點(diǎn)地福來大田專用肥示范田比對照田增產(chǎn)57.51kg/667m2。

表2 浮山示范點(diǎn)理論產(chǎn)量構(gòu)成與產(chǎn)量

[處理＼&穗數(shù)（萬/667m2）＼&每穗粒數(shù)＼&結(jié)實(shí)率（%）＼&千粒重

（g）＼&理論產(chǎn)量

（kg/667m2）＼&實(shí)際產(chǎn)量

（kg/667m2）＼&總粒數(shù)＼&實(shí)粒數(shù)＼&專用肥＼&17.35＼&117.86＼&106.81＼&90.6＼&25＼&463.29＼&393.8＼&對照＼&14.19＼&118.06＼&111.5＼&94.4＼&25＼&395.64＼&336.29＼&]

2 陳瑤湖示范點(diǎn)示范情況

2.1 示范目的 本次示范目的是在同等管理水平，施用地福來大田專用肥的示范田比對照田每667m2減少5kg氮、磷、鉀含量18%的復(fù)合肥的條件下，分析增產(chǎn)效果。

2.2 示范地點(diǎn) 樅陽縣陳瑤湖鄉(xiāng)

2.3 示范方法 同一田塊，共0.533hm2，一分為二，示范田、對照田各0.266hm2。進(jìn)水口為對照田，出水口為示范田。

2.4 示范情況 栽培方式為點(diǎn)播；品種早稻嘉興8號；用種量7.5kg/667m2；4月18日撒播。

除草時(shí)間：4月25日用36%直播凈45～60g/667m2兌水45～60kg均勻細(xì)致噴霧。藥后7d內(nèi)保持畦面濕潤狀態(tài)。

5月21日，秧齡33d進(jìn)行秧苗素質(zhì)考察，地福來大田專用肥示范田秧苗比對照株高高8.3cm，平均分蘗數(shù)多0.4個(gè)，綠葉數(shù)、白根數(shù)等都有優(yōu)勢。具體情況如表4。

表3 陳瑤湖地福來生物細(xì)胞肥水稻施用示范基本情況

[處理＼& 施肥一 ＼& 施肥二 ＼& 施肥三 ＼&種類＼&數(shù)量

（mL/667m2）＼&施肥時(shí)間＼&種類＼&數(shù)量

（kg/667m2）＼&施肥時(shí)間＼&種類＼&數(shù)量

（kg/667m2）＼&施肥時(shí)間＼&地福來示范田＼&地福來專用肥＼&200＼&5月2日＼&46%尿素＼&15＼&5月16日＼&48%復(fù)合肥＼&20＼&5月21日＼&對照田＼&空白＼&0＼&5月2日＼&46%尿素＼&15＼&5月16日＼&48%復(fù)合肥＼&25＼&5月21日＼&]

表4 5月21日秧苗素質(zhì)考察記載

[處理＼&綠葉數(shù)

（片）＼&株高

（cm）＼&根數(shù)（個(gè)）＼&分蘗數(shù)

（個(gè)）＼&總根數(shù)

（個(gè)）＼&白根數(shù)

（個(gè)）＼&白根率

（%）＼&地福來

專用肥＼&4～4.5＼&30.61＼&22.1＼&10.4＼&47.06＼&1.5＼&對照＼&4～5＼&22.31＼&17.7＼&6.8＼&38.42＼&1.1＼&]

2.5 產(chǎn)量結(jié)果分析 7月14日，對陳瑤湖周真信早稻示范田進(jìn)行測產(chǎn)，從表5可以看出，地福來大田專用肥示范田比對照田667m2有效穗數(shù)多3.34萬穗，平均穗粒數(shù)、結(jié)實(shí)率比對照略低，經(jīng)計(jì)算得出，地福來大田專用肥陳瑤湖示范田比對照田增產(chǎn)31.47kg/667m2。

表5 陳瑤湖點(diǎn)理論產(chǎn)量構(gòu)成與實(shí)際產(chǎn)量

[處理＼&667m2

穗數(shù)（萬）＼&每穗粒數(shù)＼&結(jié)實(shí)率（%）＼&千粒重

（g）＼&理論產(chǎn)量

（kg/667m2）＼&實(shí)際產(chǎn)量

（kg/667m2）＼&總粒數(shù)＼&實(shí)粒數(shù)＼&地福來

專用肥＼&22.67＼&93.72＼&84.97＼&90.65＼&25＼&481.52＼&409.29＼&對照＼&19.33＼&102.5＼&91.96＼&89.72＼&25＼&444.50＼&377.82＼&]

3 項(xiàng)鋪鎮(zhèn)唐山圩示范點(diǎn)情況

3.1 示范目的 本次示范目的是在同等的施肥管理水平下，以增加產(chǎn)量為目的。

3.2 示范地點(diǎn) 項(xiàng)鋪鎮(zhèn)唐山圩周學(xué)斌示范田

3.3 示范方法 同一田塊，共計(jì)0.667hm2，示范田0.333hm2、對照田0.333hm2。進(jìn)水口為對照田，出水口為示范田。

3.4 示范情況記載 栽培方式為機(jī)插秧；品種為單季糯稻品種：太湖糯。6月24日機(jī)插秧，秧齡20d。6月25日開始下大雨，秧苗水淹3d以上，7月9日秧苗補(bǔ)棵結(jié)束。9月5日進(jìn)入孕穗期。9月9日田間觀察，分蘗數(shù)無差別。

施肥情況：（第一次）6月中旬，施基肥17%復(fù)合肥20kg/667m2。機(jī)插秧苗后7d即7月4日追施尿素7.5kg/667m2。退水后（第二次）追施12.5kg/667m2尿素。返青后（第三次）追施10kg/667m2尿素，18%復(fù)合肥15kg/667m2。7月30日，示范田施用地福來大田專用肥200mL/667m2（1瓶），對照田未施用。9月4日，追施（穗肥）BB肥12.5kg/667m2。整個(gè)生育期共施用3次葉面肥（7月22日、8月10日、9月30日）。

3.5 產(chǎn)量結(jié)果分析 10月6日，對唐山圩示范田進(jìn)行測產(chǎn)，結(jié)果如表6。當(dāng)時(shí)示范田內(nèi)水稻正值灌漿期，所以只測667m2有效穗和每穗總粒數(shù)。結(jié)實(shí)率統(tǒng)一按90%計(jì)算。從苗情長勢分析，預(yù)計(jì)示范田比對照田成熟期早5～6d。

表6 唐山圩點(diǎn)理論產(chǎn)量構(gòu)成與實(shí)際產(chǎn)量

[處理＼&穗數(shù)（萬/667m2）＼&每穗粒數(shù)＼&結(jié)實(shí)率（%）＼&千粒重

（g）＼&理論

產(chǎn)量

（kg/667m2）＼&實(shí)際

產(chǎn)量

（kg/667m2）＼&總粒數(shù)＼&實(shí)粒數(shù)＼&地福來

專用肥＼&19.93＼&115.7＼&104＼&90＼&27＼&542.62＼&462.2＼&對照＼&19.83＼&94.71＼&85.24＼&90＼&27＼&456.38＼&387.9＼&]

篇（3）

中圖分類號：G642.0 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1674-9324（2013）46-0176-02

任何知識的學(xué)習(xí)都以學(xué)以致用為最終目的，必須做到理論聯(lián)系實(shí)際，細(xì)胞生物學(xué)的學(xué)習(xí)也是如此，而且生物這門學(xué)科本身具有較強(qiáng)的實(shí)踐性，我國在進(jìn)行生物學(xué)教學(xué)的時(shí)候，也是將實(shí)驗(yàn)教學(xué)放在首要位置的，但是，我國基于實(shí)踐的細(xì)胞生物學(xué)教學(xué)體系并不完善，需要對教學(xué)方法進(jìn)行深入的改進(jìn)，使細(xì)胞生物學(xué)的知識能在實(shí)踐研究中得到更好的應(yīng)用。

一、將細(xì)胞生物學(xué)教學(xué)與實(shí)踐結(jié)合的重要意義

1.將細(xì)胞生物學(xué)教學(xué)與實(shí)踐結(jié)合起來是學(xué)科本身發(fā)展的需求。細(xì)胞生物學(xué)是一門基礎(chǔ)性的生命科學(xué)，主要任務(wù)是研究細(xì)胞的生命活動規(guī)律，通過對細(xì)胞生命現(xiàn)象的觀察，總結(jié)出細(xì)胞生命活動的規(guī)律，進(jìn)而采用合理的方法手段控制或者引導(dǎo)細(xì)胞向有利于人們身心健康的方向發(fā)展，近些年，全球癌癥的發(fā)病率逐年上升，鑒于這種實(shí)際現(xiàn)狀，世界上的細(xì)胞生物學(xué)開始嘗試通過一定的物理或者化學(xué)手段，減少癌癥的發(fā)病率、增強(qiáng)癌癥患者的生命期，并且已經(jīng)取得了良好的研究成果，所以，生物學(xué)本身的發(fā)展就要求理論與實(shí)踐相結(jié)合。

2.將細(xì)胞生物學(xué)教學(xué)與實(shí)踐結(jié)合起來是人才培養(yǎng)的需要。目前，根據(jù)我國生物科學(xué)的發(fā)展現(xiàn)狀，生物學(xué)方面的學(xué)生就業(yè)方向主要是地方教育機(jī)構(gòu)或者一些生物方向的廠家。對于地方教育機(jī)構(gòu)來講，隨著我國教育事業(yè)的不斷發(fā)展，現(xiàn)在的生物學(xué)教育理念已經(jīng)發(fā)生了巨大的變化，現(xiàn)在的教育模式更傾向于課堂實(shí)驗(yàn)教學(xué)，老師通過課堂做實(shí)驗(yàn)，讓學(xué)生對自己得出結(jié)論。

3.將細(xì)胞生物學(xué)教學(xué)與實(shí)踐結(jié)合起來是提高教學(xué)質(zhì)量的需求。細(xì)胞生物學(xué)的實(shí)踐教學(xué)可以提高學(xué)生對事物的觀察能力和操作能力，對未來的生物數(shù)據(jù)處理和實(shí)際應(yīng)用生物理論解決問題能力也有很大的幫助，在進(jìn)行有效的生物教學(xué)之前，學(xué)校必須首先為實(shí)踐教學(xué)創(chuàng)造良好的硬件條件，購買一些先進(jìn)的生物設(shè)備、根據(jù)實(shí)際需要建立具有一定規(guī)模的實(shí)習(xí)基地，社會對學(xué)生細(xì)胞生物學(xué)的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)不僅僅是依靠學(xué)習(xí)成績，更多的是考查學(xué)生對實(shí)驗(yàn)內(nèi)容、實(shí)驗(yàn)操作細(xì)節(jié)等的理解程度。實(shí)踐是學(xué)好細(xì)胞生物學(xué)課程的基礎(chǔ)，將細(xì)胞生物教學(xué)與實(shí)踐結(jié)合起來對提高教學(xué)質(zhì)量有很好的效果。

二、提高基于實(shí)踐的細(xì)胞生物學(xué)教學(xué)效果的措施

我國的細(xì)胞生物學(xué)實(shí)踐教學(xué)主要方式是課堂的實(shí)驗(yàn)教學(xué)，所以，要想提高基于實(shí)踐的細(xì)胞生物學(xué)教學(xué)效果還得從提高實(shí)驗(yàn)教學(xué)效率入手，通過提高學(xué)生做實(shí)驗(yàn)的學(xué)習(xí)效率來達(dá)到提高生物屑教學(xué)效果的目的。

1.改變實(shí)驗(yàn)教學(xué)模式。以前我國的學(xué)校進(jìn)行細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的方法是：老師將實(shí)驗(yàn)步驟、實(shí)驗(yàn)操作、注意事項(xiàng)在實(shí)驗(yàn)之前全部告訴學(xué)生，學(xué)生在老師設(shè)置的要求里用心完成課堂實(shí)驗(yàn)，造成學(xué)生在做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，對老師的指導(dǎo)形成了嚴(yán)重的依賴性，缺乏創(chuàng)新意識，不利于學(xué)生未來實(shí)踐能力的培養(yǎng)。鑒于這種情況，我國開始改變實(shí)驗(yàn)教學(xué)模式，在保證學(xué)生生命安全的條件下，盡可能的將實(shí)驗(yàn)變成開放性實(shí)驗(yàn)，增強(qiáng)學(xué)生在實(shí)驗(yàn)過程中的自主性，學(xué)生根據(jù)自己的設(shè)想，用一定的實(shí)驗(yàn)方法去驗(yàn)證自己設(shè)想的可行性，老師的任務(wù)是現(xiàn)場監(jiān)督實(shí)驗(yàn)的安全性，對一些存在安全隱患的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行制止，并在實(shí)驗(yàn)快要結(jié)束的時(shí)候，將課本上的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行講解，并鼓勵(lì)學(xué)生無論設(shè)想是否正確都要積極去做，科學(xué)的路上本來就充滿挫折，失敗是很正常的，使學(xué)生更加愿意按照自己的設(shè)想去做實(shí)驗(yàn)，久而久之增強(qiáng)了學(xué)生的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)能力和創(chuàng)新能力，從長遠(yuǎn)來看必將推動我國甚至世界生物科學(xué)的發(fā)展。

2.及時(shí)的更換實(shí)驗(yàn)內(nèi)容?？茖W(xué)技術(shù)在不斷的進(jìn)步，生物科學(xué)也不例外。在生物學(xué)實(shí)踐教學(xué)的路上必須不斷豐富實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，及時(shí)的讓學(xué)生學(xué)習(xí)到世界先進(jìn)的研究成果或者優(yōu)良的研究方法。學(xué)?？梢愿鶕?jù)本校學(xué)生的實(shí)際情況，適當(dāng)增加實(shí)驗(yàn)的難度，在安排實(shí)驗(yàn)的時(shí)候盡量多一些創(chuàng)新性的實(shí)驗(yàn)減少驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)的比例，因?yàn)橄鄬?yīng)于驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)，創(chuàng)新性的實(shí)驗(yàn)更加有利于培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新能力和生物研發(fā)能力，創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)提前不知道實(shí)驗(yàn)結(jié)果，學(xué)生帶著問題和好奇去做實(shí)驗(yàn)，而驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)學(xué)生在做實(shí)驗(yàn)之前就已經(jīng)知道了本實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，只是通過一定的方法驗(yàn)證結(jié)論即可，此外創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不唯一，有利于培養(yǎng)學(xué)生的發(fā)散思維，根據(jù)自己對實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象的不同理解，從不同的角度得出不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)論。實(shí)驗(yàn)是一個(gè)實(shí)踐性的教學(xué)，更改實(shí)驗(yàn)內(nèi)容光從改變這些實(shí)驗(yàn)的理論是不夠的，還必須要求實(shí)驗(yàn)硬件的配合，增加在實(shí)驗(yàn)方面的投資，購買一些先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)設(shè)備，聘請一些國內(nèi)外知名的生物學(xué)教授來學(xué)校進(jìn)行教師的培訓(xùn)或者辦學(xué)生講座，軟件和硬件雙管齊下才能達(dá)到更換實(shí)驗(yàn)內(nèi)容目標(biāo)，最終提高基于實(shí)踐的細(xì)胞生物學(xué)教學(xué)效果。

3.老師根據(jù)學(xué)?，F(xiàn)有的物質(zhì)條件，合理的安排實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。雖然我們在細(xì)胞生物學(xué)的教學(xué)過程中，大力支持和發(fā)揚(yáng)實(shí)踐教學(xué)，也就是將課堂做生物實(shí)驗(yàn)作為教學(xué)的主要形式，學(xué)生通過做實(shí)驗(yàn)，將理論與實(shí)踐結(jié)合起來，并從中鍛煉自己實(shí)際解決問題的能力，甚至創(chuàng)造出一些科技成果來，但是，我們也不能盲目的追求實(shí)驗(yàn)教學(xué)，因?yàn)榇蠖鄶?shù)實(shí)驗(yàn)尤其是生物實(shí)驗(yàn)需要非常先進(jìn)的設(shè)備，有的還需要珍貴的材料做實(shí)驗(yàn)標(biāo)本，這會無形之中提高學(xué)校的教學(xué)成本，不利于學(xué)校的可持續(xù)發(fā)展，所以，必須將實(shí)踐教學(xué)與學(xué)校的實(shí)際辦學(xué)條件緊密結(jié)合起來，老師根據(jù)目前學(xué)校目前擁有的先進(jìn)設(shè)備和實(shí)驗(yàn)標(biāo)本合理的安排實(shí)驗(yàn)，保證將現(xiàn)有的資源合理利用，對于那些必須的先進(jìn)生物設(shè)備和實(shí)驗(yàn)標(biāo)本老師應(yīng)該向上級部門提出申請，希望學(xué)校能盡力滿足。當(dāng)學(xué)校的實(shí)際條件不允許的時(shí)候，老師不能將實(shí)驗(yàn)內(nèi)容省略，而是可以對實(shí)驗(yàn)的實(shí)際環(huán)境和場景進(jìn)行模擬，讓學(xué)生盡可能的感受實(shí)驗(yàn)的過程，雖然模擬環(huán)境與實(shí)踐環(huán)境有一定的差異，但是對學(xué)生未來的實(shí)踐卻有著不可忽視的作用。此外，提高生物學(xué)實(shí)踐教學(xué)效果的方法還要求老師根據(jù)本校實(shí)際情況自編實(shí)驗(yàn)教材、在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后開展實(shí)驗(yàn)討論會、完善細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的考核制度等等。

理論聯(lián)系實(shí)踐是當(dāng)代教育改革的一個(gè)重要任務(wù)，細(xì)胞生物學(xué)的教育也是如此，必須將生物知識通過具體的實(shí)驗(yàn)與實(shí)踐聯(lián)系，才能讓學(xué)生真正的理解知識的內(nèi)涵，增加對知識的理解深度，并積累豐厚的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，為以后的實(shí)際工作打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。本文通過介紹細(xì)胞生物學(xué)實(shí)踐教學(xué)的重要性，從如何提高課堂實(shí)驗(yàn)教學(xué)效率方面入手，對基于實(shí)踐的細(xì)胞生物學(xué)教學(xué)做簡要分析。

參考文獻(xiàn)：

[1]樊廷俊，初建松，細(xì)胞生物學(xué)課程教學(xué)改革與教書育人的初步嘗試[J].中國大學(xué)教育報(bào)，2003，（05）：25-25.

篇（4）

1.1材料

1.1.1不吸煙的健康成年人外周血、1 640外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基。

1.1.2主要儀器XH―600C直線加速器（高LETX射線）、培養(yǎng)箱、離心機(jī)、多媒體顯微鏡。

1.2方法采用GB/T 12715 ―91的染色體畸變分析估計(jì)生物劑量方法進(jìn)行操作。微核按WS/T 187―1999方法操作，采用常規(guī)培養(yǎng)法。

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng) 選用不吸煙的健康成年人外周血、用XH―600C直線加速器高LET的X射線0、0.1、0.5、 1.0、 1.5、 2.0、2.5 、3.0 GY照射,37 ℃保溫1 h后取0.3 ml接種于加入小牛血清、PHA、肝素的1 640培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)48 h后加秋胺使最終濃度為0.5～0.75 μmol／ml，繼續(xù)培養(yǎng)至72 h。收細(xì)胞、制片、染色。微核采用常規(guī)培養(yǎng)法觀察。

1.2.2顯微鏡分析每個(gè)照射劑量分析100個(gè)細(xì)胞的染色體，分析畸變類型有：單斷、雙斷、環(huán)、微小體、雙著絲。1 000個(gè)淋巴細(xì)胞的微核，分析典型的與主核相切或分開，結(jié)構(gòu)與主核相同，著色與主核一致，大小為主核1/3以下的小核。

2結(jié)果

2.1各項(xiàng)指標(biāo)的顯微鏡分析結(jié)果見表1。

3分析與討論

3.1實(shí)驗(yàn)室染色體畸變的正常值范圍根據(jù)《外照射慢性放射病診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則》,血細(xì)胞染色體的畸變率的增高是各實(shí)驗(yàn)室的正常值高限作標(biāo)準(zhǔn)。因此將放射從業(yè)人員的正常值范圍定在總畸變率0～4%之間，超過4%為異常。高于8%，又有雙著絲粒出現(xiàn)，可判斷超過了1 GY的劑量，有慢放病的危險(xiǎn)。

篇（5）

【中圖分類號】R73 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1004-7484（2013）11-0618-02

腫瘤生物治療技術(shù)（又稱自體免疫細(xì)胞治療技術(shù)）是指從機(jī)體自身外周血中分離的單核細(xì)胞，在經(jīng)過體外激活和擴(kuò)張后回輸患者體內(nèi)，可直接殺傷腫瘤細(xì)胞或病毒感染細(xì)胞，起到調(diào)節(jié)和增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、防治腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)以及提高患者生活質(zhì)量、延長生存期等。運(yùn)用血細(xì)胞分離機(jī)進(jìn)行外周血采集時(shí)常會遇上一些報(bào)警故障。為探討各常見報(bào)警發(fā)生的原因，尋求其預(yù)防、處理的方法，本文對我院自2009年至今進(jìn)行的2103例腫瘤生物治療患者外周血采集進(jìn)行研究?，F(xiàn)將在采集過程中常見的報(bào)警原因分析及處理簡述如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2103例腫瘤生物治療患者中：肺癌491例，肝癌432例，乳腺癌228例，黑色素瘤437例，腸道惡性腫瘤313例，其他惡性腫瘤202例。處理血量（1600～2500）ml；采集時(shí)間（50～90）min；每例采集次數(shù)1次。

1.2 外周血采集方法 應(yīng)用COM.TEC血細(xì)胞分離機(jī)，選擇程序8-干細(xì)胞采集程序進(jìn)行采集。穿刺兩條血管（一般為兩條普通大靜脈）作血管通路；血流量30ml/分～50 ml/分，總共處理3個(gè)～5個(gè)循環(huán)血量（成人一般為1600ml～25 00ml）。全程采用ACD-A抗凝劑抗凝，全血與抗凝劑的比例為8∶1～10∶1。采集過程常規(guī)口服或靜脈推注10%葡萄糖酸鈣3支～5支預(yù)防低鈣血癥，采集全程心電監(jiān)護(hù)。

1.3 研究方法 觀察每次血細(xì)胞采集出現(xiàn)的報(bào)警，并對其發(fā)生可能原因進(jìn)行分析，作出預(yù)防、處理的方法。

2 結(jié)果

血細(xì)胞分離機(jī)在采集腫瘤生物治療患者外周血中經(jīng)常會出現(xiàn)報(bào)警，但絕大多數(shù)可由有經(jīng)驗(yàn)的操作人員自行排除，不影響采集的效果。

3 討論

血細(xì)胞分離機(jī)在采集中常見的報(bào)警有：進(jìn)血管路壓力太低、回輸管路壓力過高、抗凝劑太低、無置換液、空氣探測器報(bào)警、離心機(jī)內(nèi)滲液、溶血等，其中前5類報(bào)警最常見，與文獻(xiàn)報(bào)道的相似[1]。各常見的報(bào)警發(fā)生的可能原因及預(yù)防處理措施簡述如下。

3.1 進(jìn)血管路壓力過低（Alarm Inlet Pressure too low）

3.1.1 可能原因 患者本身的血管細(xì)小，尤其是長期化療、血管破壞嚴(yán)重者；穿刺針刺破血管，引起穿刺部位血腫形成；患者情緒緊張、寒冷、疼痛的刺激或枸櫞酸鹽中毒引起血管痙攣；分離管道扭曲、折疊；靜脈插管血栓形成造成管腔堵塞，或靜脈插管位置改變致出血孔緊貼血管壁；鹽水管路連接錯(cuò)誤或夾子處關(guān)閉狀態(tài)。

3.1.2 預(yù)防及處理 檢查并去除原因。選擇粗大血管，提高穿刺成功率；采集前做好解釋工作，消除患者恐懼心理；注意保暖，蓋好被子，寒冷季節(jié)可開放暖氣等措施預(yù)防血管痙攣；采集中密切觀察穿刺部位有無腫脹，管道有無扭曲、折疊等；采集前及采集過程定期予口服或靜脈推注10%葡萄糖酸鈣可預(yù)防及糾正枸櫞酸鹽中毒[2]；讓患者反復(fù)握緊松開壓力球，并在上臂綁上彈力帶。必要時(shí)可將出入路進(jìn)行交換。

3.2 回輸管路壓力過高 （Alarm Reture Pressure too high）

3.2.1 可能原因 返血管路折疊、扭曲；返血管路側(cè)穿刺針頭堵塞；返血管路側(cè)靜脈滲漏引起局部血腫；回路閥關(guān)閉；管道安裝不正確。

3.2.2 預(yù)防及處理 檢查并去除原因。調(diào)整穿刺針位置或重新穿刺；檢查管路和回路閥的位置，及時(shí)發(fā)現(xiàn)和糾正回血線路管道扭曲和回路閥關(guān)閉等原因造成的回血壓力高報(bào)警。

3.3 抗凝劑太低（Alarm ACD too low）

3.3.1 可能原因 抗凝劑袋已空、抗凝泵管線從泵中脫出或未將滴壺放入滴數(shù)感應(yīng)器中、抗凝泵管線在抗凝劑泵之前發(fā)生漏液、抗凝劑管路上的夾子關(guān)閉、抗凝劑液面過高、滴數(shù)感應(yīng)器被遮住或太臟。

3.3.2 預(yù)防及處理 更換抗凝劑、檢查抗凝劑針接頭、裝好滴壺、打開抗凝劑管路夾子及降低抗凝劑液面（1cm以下）。

3.4 無置換液（Alarm No-replacement-fluid）

3.4.1 可能原因 置換液探測器中是空管；探測器中有氣泡或泡沫阻斷信號。

3.4.2 預(yù)防及處理 更換置換液，先將管路從探測器中取出，按開始（START）鍵，待該管路重新充滿后再放回探測器中；排除氣泡，再將置換液管路重新裝入到探測器中。

3.5 空氣探測器報(bào)警（Alarm Air Detector）

3.5.1 可能原因 回流滴量腔中的液面水平下降過多，滴量腔管壁上有氣泡或滴量腔與感應(yīng)器的接觸不良；空氣探測儀功能不良。

3.5.2 預(yù)防及處理 檢查并去除原因。按下排氣鍵（Deaerate）將滴量腔徹底充滿；敲打滴量腔除掉氣泡；清潔感應(yīng)器。重新安裝進(jìn)口空氣探測室，確認(rèn)它與傳感器接觸良好。

3.6 離心機(jī)內(nèi)滲漏（Alarm Leakage in Centrifuge）

3.6.1 可能原因 離心機(jī)離心腔內(nèi)的耗材發(fā)生泄漏；外面的液體流進(jìn)離心室。

3.6.2 預(yù)防及處理 必須更換新的耗材，并將離心腔和分離盤充分擦干；確保沒有液體從外面流進(jìn)離心室中。

3.7 溶血（Alarm Hemolysis）

3.7.1 可能原因 血漿相對透明，不過其顏色已經(jīng)變成橙色或紅色（可能發(fā)生溶血）；血漿管路中有較多的紅細(xì)胞、氣泡、泡沫。

3.7.2 預(yù)防及處理 再不能除外溶血的情況下應(yīng)停止分離，更換耗材；將血漿管路從溶血監(jiān)測器上移開，重新開始分離，待血漿中無氣泡或清亮后立即重新安裝血漿管路。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李愛萍；趙曉芳；白潔 血細(xì)胞分離機(jī)在機(jī)采血小板采集中常見報(bào)警故障[J]；中國輸血雜志；2011年11期

篇（6）

傳統(tǒng)的教師為主體的教學(xué)忽視了學(xué)生自主學(xué)習(xí)、自主探究能力的培養(yǎng)，抑制了學(xué)生的研究興趣與創(chuàng)造性，與對創(chuàng)新人才的強(qiáng)烈需求形成尖銳矛盾[2]。細(xì)胞生物學(xué)教學(xué)根據(jù)課程的特點(diǎn)和培養(yǎng)目標(biāo)，構(gòu)建課內(nèi)互動教學(xué)結(jié)合課外自主學(xué)習(xí)的“研究型”課堂課教學(xué)模式。在研究型教學(xué)中，學(xué)生是教學(xué)過程的主體，學(xué)生要在研究中學(xué)習(xí)和成長，培養(yǎng)學(xué)習(xí)的主動性和獨(dú)立性；教師在整個(gè)教學(xué)過程中起組織者、指導(dǎo)者、幫助者和促進(jìn)者的作用。課內(nèi)教學(xué)中教師發(fā)揮主導(dǎo)作用：對細(xì)胞生物學(xué)中的經(jīng)典部分進(jìn)行講解；突出學(xué)生主體地位：通過案例、專題知識等環(huán)節(jié)采用啟發(fā)引導(dǎo)、討論互動的教學(xué)方式，通過科學(xué)研究式的學(xué)習(xí)激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣，提高教學(xué)效果，使學(xué)生掌握細(xì)胞生物學(xué)中的前沿部分。因細(xì)胞生物學(xué)課內(nèi)教學(xué)學(xué)時(shí)有限，研究型課堂教學(xué)強(qiáng)調(diào)課外學(xué)生的自主學(xué)習(xí)。課外自主學(xué)習(xí)通過教師每次課后推薦的相關(guān)文獻(xiàn)、視頻等資料進(jìn)行拓展學(xué)習(xí)，同時(shí)結(jié)合文獻(xiàn)閱讀撰寫小論文和自主學(xué)習(xí)小組研討活動開展，課外學(xué)習(xí)效果納入過程性考核成績。

細(xì)胞生物學(xué)研究型課堂教學(xué)模式從杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院生物技術(shù)專業(yè)2009級學(xué)生開始，連續(xù)實(shí)施了四屆。為了解學(xué)生對細(xì)胞生物學(xué)研究型課堂教學(xué)模式實(shí)施的意見和效果評價(jià)，以期在今后的實(shí)施過程中進(jìn)一步完善，對2016年6月授課結(jié)束的2013級生物科學(xué)（非師范）專業(yè)學(xué)生進(jìn)行了課程的問卷調(diào)查。

一、調(diào)查對象與方法

（一）調(diào)查對象

杭州師范大學(xué)2016年完成學(xué)習(xí)細(xì)胞生物學(xué)課程的2013級生物科學(xué)（非師范）專業(yè)的學(xué)生。

（二）調(diào)查方法[3-4]

采用問卷調(diào)查的方法，共發(fā)放調(diào)查問卷36份，收回有效問卷34份，有效回收率為94.44%。調(diào)查問卷由學(xué)生獨(dú)立填寫，當(dāng)場回收。

二、調(diào)查內(nèi)容

調(diào)查內(nèi)容主要涉及：研究型課堂教學(xué)模式對細(xì)胞生物學(xué)課程內(nèi)容學(xué)習(xí)的影響；對本專業(yè)學(xué)習(xí)的影響；對學(xué)生綜合能力的影響；學(xué)生對研究型教學(xué)模式適應(yīng)性評價(jià)；學(xué)生對研究型教學(xué)模式課堂效果的評價(jià)和建議。

三、調(diào)查結(jié)果分析

（一）研究型課堂教學(xué)模式對課程內(nèi)容學(xué)習(xí)的影響

研究型課堂教學(xué)模式對課程內(nèi)容學(xué)習(xí)的影響見表1，在被調(diào)查的34名學(xué)生中，選擇研究型課堂教學(xué)模式能促進(jìn)理解掌握每次細(xì)胞生物學(xué)課堂教學(xué)內(nèi)容的學(xué)生為32人，占調(diào)查對象的94.12%；31名，占調(diào)查對象91.18%的學(xué)生認(rèn)為新的教學(xué)模式能更系統(tǒng)地掌握細(xì)胞生物學(xué)整門課程的知識；85.29%的學(xué)生認(rèn)為新教學(xué)模式能幫助了解細(xì)胞生物學(xué)課程的前沿內(nèi)容。

（二）研究型課堂教學(xué)模式對本專業(yè)學(xué)習(xí)的影響

研究型課堂教學(xué)模式對本專業(yè)學(xué)習(xí)的影響見表2，在被調(diào)查的34名學(xué)生中，選擇通過研究型課堂教學(xué)模式的學(xué)習(xí)獲得的能力能幫助本專業(yè)其他課程學(xué)習(xí)的學(xué)生為25人，占調(diào)查對象的73.53%；79.41%的學(xué)生認(rèn)為能激發(fā)其學(xué)習(xí)本專業(yè)的興趣；91.18%的學(xué)生認(rèn)為能拓寬本專業(yè)知識面。

（三）研究型課堂教學(xué)模式對學(xué)生綜合能力的影響

研究型課堂教學(xué)模式對學(xué)生綜合能力的影響見表3，在被調(diào)查的34名學(xué)生中，選擇通過研究型課堂教學(xué)模式的學(xué)習(xí)提高了文獻(xiàn)檢索查閱能力的學(xué)生為29人，占調(diào)查對象的85.29%，其中20.59%的學(xué)生認(rèn)為有明顯提高；58.82%的學(xué)生認(rèn)為能增加解決問題的能力；67.65%的學(xué)生認(rèn)為能增強(qiáng)團(tuán)隊(duì)協(xié)作意識；64.71%的學(xué)生認(rèn)為能增強(qiáng)與他人交流的能力。

（四）學(xué)生對研究型教學(xué)模式適應(yīng)性的情況

學(xué)生對研究型教學(xué)模式適應(yīng)性的情況見表4，在被調(diào)查的34名學(xué)生中，選擇對授課教師滿意34人，占調(diào)查對象的100%；61.76%的學(xué)生認(rèn)為與傳統(tǒng)的教學(xué)模式相比能適應(yīng)研究型的教學(xué)模式；67.75%的學(xué)生課程考核方式合理；76.47%的學(xué)生認(rèn)為新的教學(xué)模式占用的課余時(shí)間比較合理。

（五）學(xué)生對研究型教學(xué)模式課堂效果的評價(jià)

學(xué)生對研究型教學(xué)模式課堂效果的評價(jià)情況見表5，在被調(diào)查的34名學(xué)生中，23名學(xué)生更喜歡教師采用研究型教學(xué)模式進(jìn)行授課，占調(diào)查對象的67.65%；82.35%的學(xué)生認(rèn)為能夠提升學(xué)習(xí)積極性；79.41%的學(xué)生認(rèn)為課程的教學(xué)互動和課堂氛圍好；91.18%的學(xué)生建議學(xué)弟學(xué)妹們繼續(xù)采用研究型教學(xué)模式。

四、討論

細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展迅猛，課程內(nèi)容難以用教材來全部涵蓋，也無法僅靠課內(nèi)有限學(xué)時(shí)來更好地提高教學(xué)效果。因此必須發(fā)揮學(xué)生的自主性，引導(dǎo)其開展研究性的學(xué)習(xí)，以獲取新的知識[5]。自推動《細(xì)胞生物學(xué)》課程新教學(xué)模式以來，受益學(xué)生的實(shí)踐能力普遍有明顯提升，受到實(shí)習(xí)學(xué)校和用人單位的一致好評。學(xué)生的科研創(chuàng)新能力明顯提高，學(xué)生以第一作者發(fā)表科研論文4篇，獲8項(xiàng)的科研立項(xiàng)，6項(xiàng)的科研競賽獲獎。

篇（7）

[中圖分類號] R259 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）07-09-04

Parallel control analysis of Biological pump glycoprotein expression of SD rat liver cell membrane with cholesterol metabolism disorder

YU Jingxi

Department of General Surgery，the Third People's Hospital of Huizhou，Huizhou 516002，China

[Abstract] Objective To analyze the difference of Biological pump glycoprotein （Pgp） of SD rat liver cell membrane with cholesterol metabolism disorder and its related biochemical indexes and the normal rats. Methods 30 SD rats were selected and randomly divided into observation group and control group，15 rats in each group.The rats in observation group fed with high fat diet were prepared for the disorder of cholesterol metabolism in model，and rats of control group fed healthy.Immunohistochemical method was used to analyze the expression of Pgp in two groups of rats. And they were compared.The related biochemical indexes of rat liver homogenate of the two groups were also compared. Results The average Pgp value of rat liver of control group was （1.01±0.13），the liver index was （1.69±0.68）.The average Pgp value of rat liver of observation group was （5.36±1.21），the liver index was （3.35±0.37）.The average Pgp value of rat liver and liver index in observation group group were significantly higher than those of control group （P

[Key words] Cholesterol metabolism disorder；P-glycoprotein；Liver；Endocrine

肝臟是人體代謝膽固醇的主要臟器，也是唯一具有大規(guī)模清除膽固醇的臟器[1-3]。多數(shù)高脂血癥的患者通常合并有肝內(nèi)的脂肪沉淀積聚，可對患者的肝功能造成損傷，從而進(jìn)一步加劇膽固醇代謝的紊亂程度。Pgp為ATP結(jié)合盒超系列成員，于肝細(xì)胞膜上可見高表達(dá)，并參與至膽汁酸的形成與轉(zhuǎn)運(yùn)過程當(dāng)中[4-6]。本研究旨在通過動物模式觀察膽固醇代謝紊亂大鼠的Pgp蛋白的表達(dá)變化以及肝細(xì)胞脂肪的病變情況，以為膽固醇代謝紊亂的防治提供新的依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2015年3月自中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)用動物中心購買SD雄性大鼠30只，隨機(jī)分為對照組與觀察組，每組各15只。兩組大鼠月齡均為8～12個(gè)月，兩組大鼠的年齡結(jié)構(gòu)等無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。具有可比性。適應(yīng)性喂養(yǎng)時(shí)全部大鼠均食水自由，自然光照，室溫控制在18～25℃，相對濕度保持在40%～50%，每日上午加水、喂食并更換墊料。對照組大鼠給予嚙齒類動物標(biāo)準(zhǔn)飼料，確保大鼠健康，在足夠范圍內(nèi)自由活動。觀察組大鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)，高脂飼料由嚙齒類動物標(biāo)準(zhǔn)飼料86.3%、豬油5%、蛋黃粉8%、膽酸鈉0.2%、膽固醇0.5%組成，縮小大鼠活動范圍盡量減少大鼠運(yùn)動。兩組均喂養(yǎng)4周。

1.2 觀察方法

采集兩組大鼠眼底靜脈血樣3mL；立即處死，剖取肝臟，放入冷生理鹽水當(dāng)中充分漂洗，以濾紙完全吸干，以肉眼觀察大鼠的外觀并稱取質(zhì)量，依肝質(zhì)量（g）/體質(zhì)量（g）×100%公式計(jì)算肝指數(shù)。⒏臥嚳治兩部分，其中一部分肝臟以甲醇-氯仿以1∶1比例制備為100g/L的肝臟組織勻漿，使用離心機(jī)以2000r/min速度離心后取得上層上清液待檢；另一部分肝臟組織以100g/L甲醛溶液完全固定，使用石蠟包埋制作切片。所制作的石蠟切片以HE染色后于光鏡下觀測肝臟脂肪的變程度，以肝小葉中的含脂滴細(xì)胞數(shù)量/總細(xì)胞數(shù)量計(jì)算的結(jié)果作為判斷肝細(xì)胞脂肪病變的程度，以0為-、以2/3為+++。

檢測并比較對照組與觀察組大鼠肝組織當(dāng)中Pgp的表達(dá)水平，使用免疫組化測定，一抗使用羊抗鼠Pgp單克隆抗體（Invitrogen公司出品），免疫組化樣品為DAB染色，以蘇木素對全部樣本的細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染。使用Imagepro plus-6.0分析軟件分析Pgp顯色的強(qiáng)度，獲取單個(gè)組織區(qū)域面積的平均光度值。

將對照組與觀察組大鼠血樣進(jìn)行生化分析并比較，將血樣以離心機(jī)離心取得上層血清，使用全自動型生化分析儀檢測血清中各項(xiàng)肝功能相關(guān)指標(biāo)包括：谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、膽紅素（BIL）、總膽汁酸（TBA），脂質(zhì)相關(guān)指標(biāo)包括總?cè)８视停═G）、總膽固醇（Tch），肝組織勻漿中的Tch、TG及TBA水平。分析肝細(xì)胞脂肪病變的程度與Pgp表達(dá)水平的相關(guān)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

研究相關(guān)數(shù)據(jù)均以手工輸入方式錄入至SPSS20.0軟件，一人錄入、一人復(fù)核。全部數(shù)據(jù)中的計(jì)量資料均采取獨(dú)立樣本均數(shù)t檢驗(yàn)，相關(guān)性采取Spearman等級相關(guān)分析，等級資料采取Mann-Whitney U秩和檢驗(yàn)，P

2 結(jié)果

2.1 兩組肝臟Pgp光度值與肝指數(shù)比較

對照組大鼠肝臟Pgp平均光度值為（1.01±0.13），肝指數(shù)為（1.69±0.68）%；觀察組大鼠肝臟Pgp平均光度值為（5.36±1.21），肝指數(shù)（3.35±0.37）%；觀察組肝臟Pgp平均光度值與肝指數(shù)均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

2.2 肝臟脂肪病變

觀察組肝臟脂肪病變+++的發(fā)生率為53.33%，對照組無+++級別肝臟脂肪病變發(fā)生，觀察組整體肝臟脂肪病變程度較對照組嚴(yán)重，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

2.3 血清與肝勻漿生化指標(biāo)及體質(zhì)量

觀察組與對照組大鼠初始體質(zhì)量、肝勻漿比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；觀察組與對照組大鼠血清Tch、肝勻漿TBA比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

2.4 相關(guān)性分析

經(jīng)Spearman等級相關(guān)分析，肝臟脂肪病變程度與肝臟Pgp光度值呈顯著高度正相關(guān)性，r=0.996，0.8

3 討論

肝臟是人體脂肪代謝的一個(gè)主要器官[7-9]。肝細(xì)胞所合成的膽固醇于酯化作用后在27羥化酶與7α羥化酶的共同催化作用下生成膽汁酸，通過主動排泌到達(dá)膽管腔內(nèi)，從而參與到膽汁形成的過程當(dāng)中，這一過程是人體膽固醇清除的一項(xiàng)主要渠道。多數(shù)高脂血癥的患者可合并有明顯的肝內(nèi)脂肪異常聚積[10-12]，對于肝臟功能可形成持續(xù)性損傷，并可進(jìn)一步加重膽固醇代謝的紊亂[13-15]。Pgp糖蛋白以主動形式將肝細(xì)胞所合成的膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)入毛細(xì)膽管腔當(dāng)中，促使其參與至肝細(xì)胞對于膽固醇的代謝過程。Pgp非選擇性的抑制類藥物能夠有效的控制膽固醇的酯化與合成，分析其主要機(jī)理為抑制劑將膽固醇由細(xì)胞膜至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的這一轉(zhuǎn)運(yùn)過程完全或部分阻滯而形成的。細(xì)胞水平的相關(guān)研究表明Pgp的表達(dá)可致使細(xì)胞內(nèi)的膽固醇總量升高。提示了Pgp的異常表達(dá)對于膽固醇的代謝紊亂形成與發(fā)展以及肝內(nèi)脂肪發(fā)生沉積的過程發(fā)揮了促進(jìn)作用。

本研究通過高脂飼料喂養(yǎng)的方法建立了膽固醇代謝紊亂的大鼠模型，建模后觀察組肝臟脂肪病變+++的發(fā)生率為53.33%，對照組無+++級別肝臟脂肪病變發(fā)生，觀察組整體肝臟脂肪病變程度較對照組嚴(yán)重，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

綜上所述，膽固醇代謝紊亂SD大鼠的肝細(xì)胞膜生物泵糖蛋白較正常健康SD大鼠顯著升高，提示Pgp蛋白在膽固醇代謝紊亂的形成與演進(jìn)過程中均發(fā)揮著重要的促進(jìn)作用，這一研究結(jié)果希望能夠?yàn)榕R床防治及相關(guān)藥物研究提供新的參考與思路。

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篇（8）

2012年，青島農(nóng)業(yè)大學(xué)被評選為山東省首批應(yīng)用型人才培養(yǎng)特色名校建設(shè)單位。我校的植物保護(hù)專業(yè)不僅是首批國家級特色專業(yè)，而且是首批山東省應(yīng)用型人才培養(yǎng)特色名校工程重點(diǎn)建設(shè)專業(yè)之一。為了全面落實(shí)培養(yǎng)應(yīng)用型高級人才的培養(yǎng)目標(biāo)，學(xué)校出臺了《青島農(nóng)業(yè)大學(xué)關(guān)于修訂專業(yè)人才培養(yǎng)方案的指導(dǎo)意見》，新的專業(yè)人才培養(yǎng)方案重點(diǎn)強(qiáng)調(diào)應(yīng)用型導(dǎo)向、產(chǎn)業(yè)導(dǎo)向、行業(yè)導(dǎo)向和專業(yè)導(dǎo)向，讓畢業(yè)生切實(shí)面向產(chǎn)業(yè)、行業(yè)和專業(yè)生產(chǎn)一線需求。

植物保護(hù)專業(yè)是青島農(nóng)業(yè)大學(xué)的特色專業(yè)，主要培養(yǎng)掌握植物病源生物的診斷和識別及綜合治理等植物保護(hù)學(xué)科的理論和專業(yè)知識，具有植物病源生物預(yù)測和綜合治理的基本技能，能勝任在科研院所、檢驗(yàn)檢疫部門及相關(guān)公司從事基礎(chǔ)研究、產(chǎn)品開發(fā)、應(yīng)用推廣和經(jīng)營管理等工作的應(yīng)用型高級人才。2014年實(shí)施的植物保護(hù)專業(yè)人才培養(yǎng)方案中，規(guī)定了畢業(yè)生應(yīng)該具備五個(gè)方面的知識和能力，其中第一條就明確規(guī)定畢業(yè)生應(yīng)該掌握數(shù)學(xué)、化學(xué)、生物化學(xué)、植物學(xué)、植物生理學(xué)、普通遺傳學(xué)和普通微生物學(xué)等學(xué)科相關(guān)理論與知識。而且將普通微生物學(xué)位列植保專業(yè)十大專業(yè)核心課程之中。由此可見，普通微生物學(xué)對植保專業(yè)學(xué)生的重要性。主要因?yàn)槲⑸飳W(xué)是一門在分子、細(xì)胞或群體水平上研究微生物的形態(tài)構(gòu)造、生理代謝、遺傳變異、生態(tài)分布和分類進(jìn)化等生命活動基本規(guī)律，并將其應(yīng)用于工業(yè)發(fā)酵、醫(yī)藥衛(wèi)生、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、生物工程和環(huán)境保護(hù)等實(shí)踐領(lǐng)域的科學(xué)，根本任務(wù)是發(fā)掘、利用、改善和保護(hù)有益微生物，控制、消滅或改造有害微生物，為人類社會進(jìn)步服務(wù)[1]。

為了更好地培養(yǎng)適應(yīng)社會需求的應(yīng)用型和創(chuàng)新型高級人才，本文對植物保護(hù)專業(yè)開設(shè)的普通微生物學(xué)這門課程進(jìn)行了課程分析。

一、課程定位和性質(zhì)

在我校，普通微生物學(xué)主要是針對植物保護(hù)、農(nóng)學(xué)、植物科學(xué)與技術(shù)、種子科學(xué)與工程、煙草、園藝、茶學(xué)、環(huán)境科學(xué)、環(huán)境工程、農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境等專業(yè)學(xué)生開設(shè)的一門學(xué)科（專業(yè)）基礎(chǔ)課程。通過該課程學(xué)習(xí)，為學(xué)習(xí)其他專業(yè)課程奠定堅(jiān)實(shí)的微生物學(xué)基礎(chǔ)。

在植物保護(hù)專業(yè)課程體系中，普通微生物學(xué)安排在第四學(xué)期開課。相關(guān)先修課程包括高中時(shí)學(xué)習(xí)的《生物》，大學(xué)一年級已開設(shè)的《普通化學(xué)Ⅰ》、《有機(jī)化學(xué)Ⅲ》和《分析化學(xué)Ⅲ》。在第四學(xué)期同時(shí)開設(shè)的相關(guān)課程有《基礎(chǔ)生物化學(xué)》、《普通植物病理學(xué)》和《普通微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》。通過高中《生物》學(xué)習(xí)，同學(xué)們已經(jīng)具備分子與細(xì)胞、遺傳與進(jìn)化、穩(wěn)態(tài)與環(huán)境等相關(guān)知識體系[2]，對普通微生物學(xué)中關(guān)于微生物的細(xì)胞結(jié)構(gòu)、遺傳變異和微生物的生態(tài)等相關(guān)知識點(diǎn)的學(xué)習(xí)有所幫助。已修的化學(xué)課程為普通微生物課程中關(guān)于滲透壓、化學(xué)消毒劑、大量元素和微量元素等知識點(diǎn)的學(xué)習(xí)打下基礎(chǔ)。因此，普通微生物學(xué)中對于這些知識點(diǎn)的介紹可做相應(yīng)刪減。普通微生物學(xué)跟同時(shí)開設(shè)的《基礎(chǔ)生物化學(xué)》、《普通植物病理學(xué)》和《普通微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》之間相關(guān)性更大。比如，《基礎(chǔ)生物化學(xué)》中關(guān)于代謝途徑的知識點(diǎn)是重點(diǎn)講解內(nèi)容[3]，因此關(guān)于微生物代謝的知識點(diǎn)在普通微生物學(xué)課程中可以簡化講解。《普通植物病理學(xué)》中關(guān)于植物病原微生物的學(xué)習(xí)，可以使學(xué)生更深入地理解關(guān)于原核和真核微生物這部分的知識[4]。《普通微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》是普通微生物學(xué)理論課的配套課程，通過實(shí)驗(yàn)印證課堂內(nèi)容，加深對微生物的感性認(rèn)識和基礎(chǔ)理論知識及原理理解[5]。

普通微生物學(xué)的后續(xù)相關(guān)課程包括《普通遺傳學(xué)》、《農(nóng)業(yè)植物病理學(xué)Ⅰ》、《農(nóng)業(yè)植物病理學(xué)Ⅱ》、《植物化學(xué)保護(hù)Ⅰ》、《植物化學(xué)保護(hù)Ⅱ》、《普通植物病理學(xué)實(shí)習(xí)》和《植保專業(yè)科研訓(xùn)練與課程論文（設(shè)計(jì)）》等。扎實(shí)的微生物知識可以為后續(xù)理論或?qū)嵺`課程學(xué)習(xí)奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。同時(shí)，后續(xù)課程學(xué)習(xí)加深了學(xué)生對微生物知識點(diǎn)的理解和掌握。

二、教學(xué)目標(biāo)

教學(xué)目標(biāo)是教學(xué)內(nèi)容、教學(xué)方法手段及考核方式選擇的基礎(chǔ)。為了更好地培養(yǎng)適應(yīng)社會需求的應(yīng)用型和創(chuàng)新型高級人才，普通微生物學(xué)關(guān)于教學(xué)目標(biāo)的設(shè)置分為不同的目標(biāo)層次。首先，從知識目標(biāo)上，學(xué)生應(yīng)該從分子、細(xì)胞或群體水平上掌握微生物的細(xì)胞形態(tài)及構(gòu)造、類群、營養(yǎng)與代謝、生長及控制、遺傳和變異、生態(tài)分布、分類鑒定等基礎(chǔ)理論知識。掌握研究微生物的主要技術(shù)和方法。其次，從能力目標(biāo)層次上，要求學(xué)生利用微生物學(xué)的基礎(chǔ)理論知識和基本研究方法，分析和解決日常生活、生產(chǎn)實(shí)踐和科研中遇到的相關(guān)問題，具有良好的知識遷移能力。最后，在素質(zhì)目標(biāo)層次上，使學(xué)生在學(xué)習(xí)普通微生物學(xué)課程的過程中，培養(yǎng)獨(dú)立思考、嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的治學(xué)態(tài)度，培養(yǎng)學(xué)生的團(tuán)隊(duì)合作與創(chuàng)新精神，培養(yǎng)學(xué)生不折不撓、愛崗敬業(yè)的職業(yè)道德素質(zhì)。

三、課程內(nèi)容設(shè)計(jì)

本課程將選用周德慶主編的微生物學(xué)教程（第3版）。本書被教育部列為“普通高等教育‘十一五’國家規(guī)劃教材”。本書是一本結(jié)構(gòu)嚴(yán)密、內(nèi)容豐富、知識新穎和可讀性強(qiáng)的基礎(chǔ)課啟蒙教材。本課程總計(jì)32學(xué)時(shí)，共2學(xué)分；每周2課時(shí)，每次2學(xué)時(shí)，歷時(shí)8周。根據(jù)植物保護(hù)專業(yè)的特點(diǎn)及學(xué)時(shí)安排，在課程內(nèi)容設(shè)置上對教材略作刪減和調(diào)整，比如，把教材關(guān)于傳染與免疫的內(nèi)容更換為微生物資源的開發(fā)與利用，介紹如何根據(jù)微生物的特點(diǎn)進(jìn)行微生物資源的開發(fā)利用，以及微生物化肥和微生物農(nóng)藥等跟植物保護(hù)專業(yè)息息相關(guān)的知識。同時(shí)，在講解原核微生物、真核微生物及病毒等章節(jié)時(shí)，聯(lián)系實(shí)際、多舉例介紹該種微生物對植物的致病或保護(hù)作用。

總體上，本課程共計(jì)十章內(nèi)容，具體安排是：緒論（2學(xué)時(shí)）；原核微生物的形態(tài)、構(gòu)造及功能（4學(xué)時(shí)）；真核微生物的形態(tài)、構(gòu)造及功能（4學(xué)時(shí)）；病毒和亞病毒因子（4學(xué)時(shí)）；微生物營養(yǎng)和代謝（4學(xué)時(shí)）；微生物的生長及其控制（2學(xué)時(shí)）；微生物遺傳和變異（4學(xué)時(shí)）；微生物生態(tài)（4學(xué)時(shí)）；微生物的分類和鑒定（2學(xué)時(shí)）；微生物資源開發(fā)與應(yīng)用（4學(xué)時(shí)）。

四、學(xué)情分析

植物保護(hù)專業(yè)人才培養(yǎng)方案（2014級實(shí)施）規(guī)定，學(xué)生在第四學(xué)期需要修滿21門課程，課內(nèi)學(xué)時(shí)數(shù)超過512個(gè)學(xué)時(shí)，平均周學(xué)時(shí)數(shù)為30.4個(gè)學(xué)時(shí)，因此學(xué)生學(xué)習(xí)壓力大，業(yè)余時(shí)間少。根據(jù)以往教學(xué)經(jīng)驗(yàn)，本專業(yè)學(xué)生在學(xué)習(xí)微生物課程時(shí)，比較難掌握的內(nèi)容包括微生物營養(yǎng)類型、新陳代謝、遺傳與變異等。加之本課程教材內(nèi)容多，學(xué)時(shí)少，記憶型知識較多，教學(xué)內(nèi)容枯燥，晦澀。因此，學(xué)習(xí)本課程時(shí)，需要學(xué)生集中注意力，認(rèn)真聽課做筆記。但現(xiàn)代學(xué)生普遍對手機(jī)依賴性高，自控力較差，這就需要教師采用多種教學(xué)方法，抓住學(xué)生注意力，引導(dǎo)學(xué)生掌握知識。

五、教學(xué)方法與手段

跟植物和動物相比，微生物形態(tài)小，肉眼幾乎不可見，較為抽象。教師要采用多種教學(xué)方法，以抓住學(xué)生注意力為核心。

在課堂上，本門課程教學(xué)過程以PPT多媒體為主要載體，以講授為主，PPT的呈現(xiàn)形式應(yīng)該注重以下幾點(diǎn)：內(nèi)容條理清晰、重點(diǎn)突出；對知識點(diǎn)及時(shí)進(jìn)行歸納、總結(jié)；增加圖片、表格動畫等，減少文字，并且講解時(shí)做到先形象（圖片、流程圖、視頻動畫），后概念（文字）；難點(diǎn)問題要結(jié)合板書講解。知識點(diǎn)講解要與日常生活、社會熱點(diǎn)結(jié)合，與教師自身經(jīng)歷、科研相結(jié)合，同時(shí)語言幽默生動，增強(qiáng)教學(xué)效果。每次上課，先以提問方式回顧上節(jié)課內(nèi)容，可以提高同學(xué)們的注意力，知識連貫性。課間放些微生物相關(guān)視頻、歌曲，提高學(xué)生興趣。

課堂外，要充分利用學(xué)校網(wǎng)絡(luò)教學(xué)平臺，在線答疑解惑。鼓勵(lì)學(xué)生參加學(xué)校組織的相關(guān)技能大賽或進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行科研訓(xùn)練，提高動手能力的同時(shí)培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的科研態(tài)度，為培養(yǎng)具有創(chuàng)新精神和實(shí)踐能力的高素質(zhì)人才奠定良好基礎(chǔ)。

六、考核方式

本門課程考核方式為閉卷考試，成績分三部分：即卷面成績占70分，平時(shí)占20分，考勤成績占10分，滿分100分。試卷分基本題型、擴(kuò)展題型和提高題型，要求試題內(nèi)容覆蓋整個(gè)課程，難易適中?？记谥饕ㄟ^不定期點(diǎn)名、課前提問等方式檢查，要求學(xué)生不遲到，不無故缺席，提高學(xué)生課程參與度。平時(shí)成績主要包括課堂提問、檢查課堂筆記。

七、教學(xué)反饋與教學(xué)效果

教學(xué)效果的評價(jià)與反饋包括多種形式：首先，學(xué)校學(xué)院組織相關(guān)領(lǐng)導(dǎo)、督導(dǎo)或同行隨機(jī)聽課，在監(jiān)督的同時(shí)給出建設(shè)性意見并傳授教學(xué)經(jīng)驗(yàn)；其次，對學(xué)生發(fā)放調(diào)查問卷，對教師的教學(xué)方法提意見、建議，教師快速、及時(shí)和高質(zhì)量地反饋；課程結(jié)束后，學(xué)生通過學(xué)校評教系統(tǒng)給教師上課情況和學(xué)生打分。考試結(jié)束后，教師根據(jù)學(xué)生卷面情況給出詳細(xì)的試卷分析，真正做到“以教評教”、“以學(xué)評教”相結(jié)合。

通過以上七個(gè)方面的課程分析，我們對植保專業(yè)的普通微生物學(xué)具體授課環(huán)節(jié)進(jìn)行了調(diào)整和優(yōu)化，提高了教師的教學(xué)水平和同學(xué)們的學(xué)習(xí)興趣，從而為更好地培養(yǎng)適應(yīng)社會需求的，具備較好普通微生物學(xué)綜合技能的應(yīng)用型和創(chuàng)新型植物保護(hù)專業(yè)人才奠定基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

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[3]朱新產(chǎn)，高玲.基礎(chǔ)生物化學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2015.

篇（9）

1PBL教學(xué)法的特點(diǎn)

PBL是一種基于問題的學(xué)習(xí)法，它是1969年由美國神經(jīng)病學(xué)教授Barrows在加拿大麥克馬斯特大學(xué)首創(chuàng)的，這種教學(xué)法出現(xiàn)后在歐美國家被很快廣泛應(yīng)用［2］。它自1990年代引入我國后在醫(yī)學(xué)教育中得到很好的發(fā)展。典型的PBL過程包括三個(gè)階段，即提出問題，分析問題和匯報(bào)結(jié)果。在提出問題階段，學(xué)生可根據(jù)自己了解的知識和組員合作提出需要明確的問題，也可以由教師根據(jù)教學(xué)大綱提出針對性的問題；在分析問題階段，每個(gè)學(xué)生通過自學(xué)分析提出的問題；在匯報(bào)結(jié)果階段，學(xué)生上課時(shí)匯報(bào)自己的觀點(diǎn)，教師在課堂上旁聽學(xué)生觀點(diǎn)并給出補(bǔ)充意見。與傳統(tǒng)的授課式教學(xué)法不同，它強(qiáng)調(diào)以學(xué)生為中心，主動學(xué)習(xí)為主。教師的目的是提供學(xué)習(xí)材料，在課堂上引起學(xué)生討論和監(jiān)控整個(gè)學(xué)習(xí)過程。PBL教學(xué)法的好處是能提高學(xué)生主動學(xué)習(xí)的興趣，活躍課堂氣氛，避免課程變得枯燥無味的同時(shí)也提高了學(xué)生的潛力和創(chuàng)造力。

2多媒體直觀教學(xué)法特點(diǎn)

多媒體直觀教學(xué)法是在傳統(tǒng)的單純文字書寫的幻燈片課件中加入較多的圖像、視頻和聲音演示，從而能將圖像、動畫和理論有機(jī)地結(jié)合，將微觀復(fù)雜的理論概念形象、直觀地表現(xiàn)出來。它能使學(xué)生在視覺、聽覺的多樣化刺激中得到知識的擴(kuò)展，還可激發(fā)學(xué)習(xí)興趣，提高學(xué)生的積極性，使學(xué)生對所學(xué)知識更容易理解和長久記憶。此外，該法還能提高教師的知識水平與興趣，教師如果按照傳統(tǒng)的授課方式一成不變的話，很容易在年復(fù)一年的教學(xué)中感到疲乏單調(diào)，從而失去講課的激情，教學(xué)質(zhì)量也會跟著降低。若是采用多媒體教學(xué)法，教師可以從網(wǎng)上把不斷更新的醫(yī)學(xué)信息、圖片、視頻、flash等加入多媒體課件中，直觀的放映給學(xué)生，而學(xué)生在第一時(shí)間獲得了新知識，開拓了新視野，會更加配合教師的教學(xué)，這樣也促進(jìn)了教師的教學(xué)。

3兩種方法結(jié)合的教學(xué)模式在《細(xì)胞分子生物學(xué)》課程中的意義

《細(xì)胞分子生物學(xué)》又叫分子細(xì)胞生物學(xué)，是由細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)相互銜接滲透而產(chǎn)生的一門新興學(xué)科。包括細(xì)胞代謝、增殖、分化、衰老、凋亡等內(nèi)容［3］。如今，該學(xué)科的理論與技術(shù)正被廣泛的應(yīng)用于臨床疾病的診療及科研工作中，并在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)展中占據(jù)著重要的地位，因此，加強(qiáng)醫(yī)學(xué)生細(xì)胞分子生物學(xué)的教育意義重大。目前，《細(xì)胞分子生物學(xué)》這門課程在國內(nèi)開設(shè)的院校仍較少，可借鑒的教學(xué)經(jīng)驗(yàn)并不多［3］，且內(nèi)容微觀抽象，又是幾門學(xué)科整合形成，因而是一門較難學(xué)的醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)課程。用傳統(tǒng)的板書及其他文字形式的教學(xué)方法授課，學(xué)生常會感覺到概念模糊，一知半解。而在PBL教學(xué)中，學(xué)生每次課前事先完成了小組探討或教師制定的問題，在該次課前對所要學(xué)的內(nèi)容有了一個(gè)初步的認(rèn)識，再在課堂上通過表達(dá)自己的思想并發(fā)現(xiàn)自己的錯(cuò)誤觀點(diǎn)，通過教師以及同學(xué)的補(bǔ)充和分析使自己的知識面得到擴(kuò)展。但這種方法也具有它的局限性，主要表現(xiàn)在：PBL注重解決單一問題，而忽略了學(xué)生對知識點(diǎn)的系統(tǒng)掌握，學(xué)生對所學(xué)知識缺乏連貫性。另外，PBL是以分組討論的形式上課，如在大班教學(xué)中運(yùn)用會消耗過多時(shí)間，也需要更多的教師來引導(dǎo)各小組，這樣會浪費(fèi)資源也降低教學(xué)效率。PBL教學(xué)法結(jié)合多媒體直觀教學(xué)法是一種以學(xué)生為主體，教師為主導(dǎo)，以實(shí)際問題為出發(fā)點(diǎn)的教學(xué)模式［4］。它不僅使學(xué)生有效掌握了基礎(chǔ)理論知識，激發(fā)了學(xué)習(xí)的興趣，而且培養(yǎng)了他們的自學(xué)能力和創(chuàng)新能力，又彌補(bǔ)了單用PBL法的不足，從而提高了教學(xué)質(zhì)量。武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)部病毒學(xué)教研室在細(xì)胞分子生物學(xué)課中將多媒體直觀教學(xué)法與PBL相結(jié)合，即每次課的前一部分時(shí)間教師用多媒體直觀教學(xué)法授課，后一部分時(shí)間用PBL教學(xué)法討論問題，兩種方法優(yōu)勢互補(bǔ)，實(shí)現(xiàn)對學(xué)生的高效培養(yǎng)。

4兩種方法結(jié)合的教學(xué)模式的實(shí)施及其評價(jià)

篇（10）

[文章編號]1006-1959(2009)07-0280-02

腎細(xì)胞癌(renalcellcarcinoma,RCC)是泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一,長期危害著人類健康。近十年來,對腎細(xì)胞癌的分子生物學(xué)研究取得了長足的進(jìn)展,使我們對腎細(xì)胞癌有了更深刻的認(rèn)識。本文就腎細(xì)胞癌各種病理分型的分子生物學(xué)研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1腎細(xì)胞癌發(fā)生的分子生物機(jī)制

腎癌的發(fā)生發(fā)展是多階段、多步驟的過程,包括癌基因激活和抑癌基因(tumorsuppressorgene,TSG)失活在內(nèi)的一系列遺傳學(xué)改變。抑癌基因的缺失或失活是腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中重要的分子事件之一。腫瘤常在抑癌基因位點(diǎn)出現(xiàn)染色體基因缺失,表現(xiàn)為等位基因雜合性缺失(lossofheterozygosity,LOH),通過檢測分析腫瘤LOH及其規(guī)律,可在染色體一定范圍內(nèi)發(fā)現(xiàn)腫瘤的抑癌基因及易感基因。為了能較全面的了解導(dǎo)致腎細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵分子事件,不同學(xué)者對腎細(xì)胞癌全基因組進(jìn)行了不同的研究,發(fā)現(xiàn)腎細(xì)胞癌發(fā)生高頻率LOH主要見于以下幾個(gè)染色體:3p、5q、8p、9p、10q、14q、17和18q染色體。

1.13號染色體:3號染色體短臂的部分缺失是腎癌基因改變中的高發(fā)事件。其中定位于3p25-26的VHL抑癌基因被認(rèn)為是這些基因改變的首要目標(biāo)。在以前的研究中,VHL在腎透明細(xì)胞癌(cc-RCC)中的失活機(jī)制主要為等位基因缺失和突變,DNA超甲基化很少見。劉寧等利用PCR限制性片段長度多態(tài)性法對3號染色體上的VHL基因的兩個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行檢測來分析VHL基因的雜合性缺失失情況,發(fā)現(xiàn),42%(8/19)發(fā)生VHL基因LOH,并未發(fā)現(xiàn)VHL基因失活與腫瘤的分期、分級存在聯(lián)系。

有雜合性缺失研究顯示,有可能在染色體3p上存在另外的RCC相關(guān)抑癌基因。定位于染色體3p14.2上包含最常見的FRA3B脆性位點(diǎn)的FHIT基因作為候選抑癌基因日益受到關(guān)注。Velickovic等通過選擇性的檢測FHIT區(qū)域的LOH發(fā)生情況認(rèn)為這個(gè)基因在ccRCC的發(fā)展過程中起到很重要的作用。并且發(fā)現(xiàn)在cc-RCC中染色體3p的LOH發(fā)生率達(dá)76%。Farkas等對88例腎細(xì)胞癌病例進(jìn)行LOH研究,選取了3p14.2-p25范圍內(nèi)16個(gè)位點(diǎn)采用PCR技術(shù)進(jìn)行LOH分析,結(jié)果顯示VHL基因和FHIT基因區(qū)域,透明細(xì)胞癌的LOH發(fā)生率高達(dá)96%,而狀細(xì)胞癌和嫌色細(xì)胞癌僅為10%和18%,并且LOH的發(fā)生率與腫瘤大小、分期、分級無關(guān)。從而認(rèn)為VHL和FHIT的等位基因缺失是腫瘤發(fā)生的早期事件。

1.25號染色體:1986年APC基因首次在一位患有息肉病及多種其它先天性畸形患者的5號染色體長臂片段先天性中間缺失中得到證實(shí),確切的基因位點(diǎn)隨后由定位克隆確定。Pecina-SlausN等利用相對外顯子11和15的特殊寡核苷酸引物對36例腎細(xì)胞癌病例進(jìn)行限制性片段長度多態(tài)性的檢測,了解與APC基因相關(guān)的LOH情況,并同時(shí)檢測APC蛋白的表達(dá)情況。研究發(fā)現(xiàn)36例樣本中有33例為信息性病例,其中有17例出現(xiàn)LOH,并且LOH的發(fā)生與年齡以及腫瘤的TNM分期呈正相關(guān)。但并不是所有出現(xiàn)LOH的病例都有APC蛋白的表達(dá)。從而認(rèn)為APC基因與腫瘤的進(jìn)展有著密切關(guān)系,可能不是腫瘤發(fā)生的早期事件。

1.38號、9號染色體:Presti等學(xué)者對72例腎透明細(xì)胞癌進(jìn)行LOH測定,并將LOH作為臨床預(yù)后指標(biāo)的評估,他們選取了3p,8p,9p,14q四個(gè)不同的染色體,在每個(gè)染色體上選取兩對引物,結(jié)果顯示8p、9p的LOH發(fā)生率與腫瘤復(fù)發(fā)率正相關(guān)。由此推測8p、9p的LOH可作為判斷局部進(jìn)展型腎癌預(yù)后的一個(gè)指標(biāo)。

近年來許多學(xué)者在多種腫瘤,如肺癌、食管癌、黑色素、胃癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤等研究中均發(fā)現(xiàn),9號染色體常出現(xiàn)較高頻率的LOH,所以推測9號染色體上存在不止一個(gè)與這些腫瘤的發(fā)生相關(guān)的抑癌基因。Fukunaqa等利用熒光多重PCR技術(shù)比較提取自腫瘤組織和對應(yīng)的外周血液樣本中的DNA,通過對9號染色體上的13個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)109例腎細(xì)胞癌中27例至少有一個(gè)位點(diǎn)出現(xiàn)LOH,其中最高發(fā)生率出現(xiàn)在PTCH基因所在的9P22區(qū)域。而Sanz-casla等對40例單發(fā)腎細(xì)胞癌病例同時(shí)進(jìn)行p16基因附近染色體9p21區(qū)域的LOH和p16基因啟動子超甲基化的檢測,出現(xiàn)LOH的為9例,超甲基化的為8例但是兩者之間沒有必然聯(lián)系由此推測p16基因的失活和其他未知的抑癌基因共同參與腎細(xì)胞癌的發(fā)病機(jī)制。Grady則通過對60例腎細(xì)胞癌病例進(jìn)行9號染色體上的16個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的LOH分析,60例樣本中至少一個(gè)位點(diǎn)出現(xiàn)LOH的為44例,主要缺失區(qū)域出現(xiàn)在位于9p21的DS171、D9S1749和DS270上。有46%的病例在9q32-9q33出現(xiàn)LOH,在這一區(qū)域的D9S170位點(diǎn)LOH發(fā)生率達(dá)22%,研究認(rèn)為除了在9p21附近的p16候選抑癌基因外,在9p21以及9q32-9q33附近很有可能存在其它的抑癌基因。

1.410號染色體：Velickovic等對10號染色體上與PTEN/MMAC1抑癌基因相關(guān)的7個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記物L(fēng)OH發(fā)生率進(jìn)行分析，其中腎透明細(xì)胞癌的LOH發(fā)生率為37.5%，狀細(xì)胞癌為29.7%，嫌色細(xì)胞癌為87.5%，且LOH發(fā)生率與腫瘤的分期、分級和生存率有關(guān)，并且認(rèn)為雙等位基因失活的發(fā)生多由非點(diǎn)突變畸變導(dǎo)致。

1.514號染色體：Kaku等對染色體14q24-31區(qū)域的7個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)42例信息性病例中23例（54.8%)出現(xiàn)LOH，并發(fā)現(xiàn)LOH發(fā)生最普遍的區(qū)域位于D14S67附近的2-Mb范圍，且LOH的發(fā)生率與腫瘤分期呈正相關(guān)。同樣Alimov等利用2個(gè)RFLP位點(diǎn)對45例腎細(xì)胞癌患者進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)45例信息性病例中17例（38%）在染色體14q31-q32.2上出現(xiàn)LOH，并且LOH的發(fā)生率與腫瘤的分級和低生存率正相關(guān)。而Gallou等的實(shí)驗(yàn)則將14q上的普遍缺失區(qū)域定位于D14S281到D14S277之間。另外有學(xué)者對130例腎透明細(xì)胞癌病例采用D14S588、D14S617、GATA136B01三個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行LOH分析，數(shù)據(jù)顯示LOH發(fā)生率與腫瘤大小、組織學(xué)分級、生長速度以及致死率呈正相關(guān)。

以上關(guān)于14q染色體的LOH研究均顯示與腫瘤的分級和低生存率呈正相關(guān)關(guān)系，表明腫瘤的14qLOH很可能與腫瘤的侵襲發(fā)展有關(guān)。

1.617號染色體：p53基因位于17p13.1上，具有反式激活功能和廣譜抑癌作用，與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有關(guān)。因此研究染色體17p上TP53位點(diǎn)的LOH情況對于揭示P53在腫瘤發(fā)生過程中發(fā)揮的作用意義重大。在29例腎細(xì)胞癌中，W.M.L.報(bào)道了關(guān)于P53的雜合性缺失為48%(14/29)，并通過序列測定確認(rèn)單鏈構(gòu)象多態(tài)性而發(fā)現(xiàn)了有11例出現(xiàn)突變。Ogawa等利用p53基因附近的5個(gè)多態(tài)性探針對48例腎癌進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)染色體17p的等位基因缺失率為17%(6/36)，并且染色體17p的等位基因缺失與腫瘤分期無確切相關(guān)性。其他研究者發(fā)現(xiàn)在17號染色體上還存在著其它LOH發(fā)生區(qū)域。Khoo等對BHD基因區(qū)域的2個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)D17S740和D17S2196進(jìn)行檢測，28例腎細(xì)胞癌中10例（36%）出現(xiàn)LOH，其中6例嫌色細(xì)胞癌中2例（33%）出現(xiàn)LOH，6例狀細(xì)胞癌中出現(xiàn)5例（83%），透明細(xì)胞癌12例出現(xiàn)3例（25%）。并推測BHD基因可能在腎臟腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。而Simon-kayser等對處于17q11到17q23之間的7個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記物進(jìn)行檢測，15例狀腎細(xì)胞癌中14例為信息性病例7例出現(xiàn)LOH。發(fā)生頻率最高的為與FBXO47候選抑癌基因相關(guān)的D17s250位點(diǎn)。

1.718號染色體：Hirata等對126例腎透明細(xì)胞癌病例進(jìn)行研究，通過對染色體18q上的9個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)24例(19%)發(fā)生LOH，LOH最高發(fā)生率出現(xiàn)在DCC基因所在的18q21.3區(qū)域，并發(fā)現(xiàn)LOH的發(fā)生率與性別、腫瘤分期、分級、等參數(shù)無關(guān)。認(rèn)為DCC和SMAD4可能做為候選抑癌基因與腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生有關(guān)。 2腎細(xì)胞癌的病理分型與分子生物學(xué)機(jī)制

1997年國際抗癌聯(lián)盟(UICC)和美國癌癥聯(lián)合委員會(AJCC)根據(jù)已知基因改變以及腫瘤細(xì)胞起源，并結(jié)合腫瘤細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)將腎癌分為透明細(xì)胞癌(clearcellrenalcellcarcinoma)、狀腎細(xì)胞癌(papillaryrenalcellcarcinoma)、嫌色細(xì)胞癌(chromophoberenalcellcarcinoma)和集合管癌（carcinomaofthecollectingducts）4種基本形式。約有4％~5％腎癌細(xì)胞形態(tài)及遺傳學(xué)改變不一，細(xì)胞成分混雜或有未識別的細(xì)胞成分，此類腫瘤歸為未分類腎細(xì)胞癌（renalcellcarcinoma，unclassified），有待今后進(jìn)一步研究。由于在各型腎癌組織中都可見到細(xì)胞質(zhì)中含有嗜酸顆?；蛩笮渭?xì)胞成分，所以在新分類中取消了顆粒細(xì)胞癌和肉瘤樣癌。

腎透明細(xì)胞癌或稱為傳統(tǒng)的腎細(xì)胞癌或非狀腎癌，約占70％~80％，是最常見的病理類型，起源于腎近曲小管。已明確的遺傳學(xué)改變是以3p缺失、VHL基因突變、甲基化或缺失為特征，此外尚有不十分明確的改變。綜合國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道，常見的染色體缺失區(qū)域包括4q、6q、9p、13q、Xq、8p，常見的染色體擴(kuò)增區(qū)域包括5q、9q、17p、17q。Jiang等利用分枝樹模型及時(shí)間樹模型對腎癌比較基因組雜交數(shù)據(jù)進(jìn)行分析后認(rèn)為透明細(xì)胞癌至少可能分為兩個(gè)亞型，一型伴有-6、+17p、+17q，另一型伴有-9p、-13q、-18q。-4q是透明細(xì)胞癌發(fā)展過程中除-3p外的另一重要早期事件，-8q多出現(xiàn)在轉(zhuǎn)移灶中，是原發(fā)性透明細(xì)胞癌的一個(gè)晚期事件，9p、13q上可能存在與腎癌進(jìn)展相關(guān)的抑癌基因。

狀腎細(xì)胞癌或稱為嗜色腎細(xì)胞癌或腎小管狀癌，約占10％一15％，是第二常見的腎惡性腫瘤，可能起源于腎近曲小管。遺傳學(xué)上，以Y染色體丟失、7號染色體和17號染色體的三倍體或四倍體異常為特征，此外較典型的分子遺傳學(xué)異常尚有C-MET基因活化、+12q、+16q、+20q、-1P、-4q、-6q、-9p、-13q、-xp、-xq、-Y等。Delahunt和Eble在1997年應(yīng)用免疫組化方法分析91例狀腎細(xì)胞癌，根據(jù)形態(tài)學(xué)改變分為2型，1型狀腎細(xì)胞癌光學(xué)顯微鏡下呈管狀結(jié)構(gòu)，被覆小細(xì)胞，含有卵圓形小細(xì)胞核，核仁不顯著，胞質(zhì)少、灰白。2型狀腎細(xì)胞癌為狀結(jié)構(gòu)，被覆豐富嗜酸性胞質(zhì)的大細(xì)胞，含有大球形細(xì)胞核。分析結(jié)果顯示：7號染色體和17號染色體倍體異常多見于狀腎細(xì)胞癌1型，而-Xp常提示預(yù)后不良。與透明細(xì)胞癌相比，狀腎細(xì)胞癌的多灶性或雙腎癌更常見。

嫌色細(xì)胞腎細(xì)胞癌約占5％，起源于腎集合小管暗細(xì)胞。遺傳學(xué)以多個(gè)染色體丟失和單倍體為特征，LOH常發(fā)生在1、2、6、10、13、17或21號染色體。