序論：好文章的創(chuàng)作是一個不斷探索和完善的過程，我們?yōu)槟扑]十篇核酶的化學(xué)本質(zhì)范例，希望它們能助您一臂之力，提升您的閱讀品質(zhì)，帶來更深刻的閱讀感受。

篇（1）

反例教學(xué)法是指教師呈現(xiàn)少數(shù)精選的特例，引導(dǎo)學(xué)生進(jìn)行批判的一種教學(xué)方法。因為反例教學(xué)法是從教學(xué)實際中來的，所以此種教學(xué)方法具有真實、生動的特點，能激發(fā)學(xué)生積極的情感，引起學(xué)生內(nèi)心的共鳴，活躍學(xué)生的思維。反例教學(xué)法使用得當(dāng)，一定能收到比正面切入更好的效果。

1. 光合作用一定需要葉綠體嗎？

舉個簡單的反例吧，藍(lán)藻是原核生物，并沒有葉綠體這種細(xì)胞器，但它依然能夠憑借體內(nèi)的藻藍(lán)素進(jìn)行光合作用，把太陽能轉(zhuǎn)化為有機物中穩(wěn)定的化學(xué)能，所以光合作用必須要有光合色素，但并不一定需要葉綠體。

2. 生態(tài)系統(tǒng)中的生產(chǎn)者一定進(jìn)行光合作用嗎？

反例是硝化細(xì)菌只能進(jìn)行化能合成作用。生產(chǎn)者屬于自養(yǎng)生物，因此包括：

①進(jìn)行光合作用的綠色植物；②進(jìn)行化能合成作用的細(xì)菌，如硝化細(xì)菌、硫細(xì)菌等；③進(jìn)行光合作用的細(xì)菌，例如光合細(xì)菌等。

光合作用和化能合成作用都是自養(yǎng)的方式。主要不同點是：直接能源不同，光合作用的直接能源是光能，而硝化作用的直接能源是化學(xué)能，硝化細(xì)菌將氨氣氧化，形成硝酸：

2NH3+3O22HNO2+2H2O 2HNO2+O22HNO3在這兩步反應(yīng)中都釋放出化學(xué)能，將無機物合成有機物。

3. 動物在生態(tài)系統(tǒng)中的成分一定是消費者嗎？

不一定。動物絕大多數(shù)是消費者，有少部分是分解者，如屎克螂、蚯蚓，甚至大型動物如禿鷲等。

4. 進(jìn)行有氧呼吸的生物一定有線粒體嗎？

不一定。好氧細(xì)菌，專性好氧菌，兼性厭氧菌等細(xì)菌只有核糖體而無其它細(xì)胞器，也能進(jìn)行有氧呼吸，原因是含有跟有氧呼吸有關(guān)的酶，它們散布在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)內(nèi)，有的也在細(xì)胞膜內(nèi)膜上。效率是比擁有線粒體的細(xì)胞低的，而線粒體是真核生物主要提供能量的“動力車間”。

5. 單細(xì)胞的生物一定是原核生物嗎？

不一定。酵母菌是單細(xì)胞生物，但是真核生物。原生動物都是真核生物，但也是單細(xì)胞的生物。例如：草履蟲，變形蟲。

6. 酶的化學(xué)本質(zhì)一定是蛋白質(zhì)嗎？

不一定。酶的化學(xué)本質(zhì)大多數(shù)是蛋白質(zhì)，少部分是RNA。

化學(xué)本質(zhì)是RNA的酶指核酶。核酶是具有催化功能的RNA分子，是生物催化劑。它的發(fā)現(xiàn)打破了酶是蛋白質(zhì)的傳統(tǒng)觀念。核酶與蛋白質(zhì)酶相比，核酶的催化效率較低，是一種較為原始的催化酶。

7. 真核細(xì)胞中的DNA一定分布在細(xì)胞核中嗎？

不一定。DNA主要在細(xì)胞核內(nèi)，線粒體，葉綠體的基質(zhì)也有。

8. 真核細(xì)胞中的RNA一定分布在細(xì)胞質(zhì)中嗎？

不一定。RNA主要在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，還有少數(shù)在細(xì)胞核和核糖體內(nèi)。

9. 所有的植物在生態(tài)系統(tǒng)中一定是生產(chǎn)者嗎？

不一定。 如： 菟絲子不能進(jìn)行光合作用，只能營寄生生活，所以不屬于生產(chǎn)者。

10. 生態(tài)系統(tǒng)中所有的細(xì)菌一定是分解者嗎？

不一定。營腐生生活的細(xì)菌是分解者，而硝化細(xì)菌能進(jìn)行化能合成作用，屬于自養(yǎng)生物。在生態(tài)系統(tǒng)中屬于生產(chǎn)者。

篇（2）

首先,大多數(shù)的蛋白酶在高溫下分子結(jié)構(gòu)遭到破壞,并失去了活性,特別是大多數(shù)的蛋白酶,因為蛋白質(zhì)的變性而失去活性,這種變性大多是不可逆的,而且隨著溫度的升高,這種變性更無恢復(fù)的可能,也就是說曲線的右側(cè)的某一位置上應(yīng)該與橫坐標(biāo)有一個交點,而課本上的插圖沒有。為此筆者完整地摘錄了《生化簡明教程》插圖如下:

從圖上可以明確看出右側(cè)也沒有交點。對于蛋白類的酶來說,高溫時失去活性是肯定的,是不是對于核酶來說有例外呢?筆者專門請教了南京師范大學(xué)的教授,得到的回答也是肯定的,RNA酶在高溫下也會失去活性,也就是說即使是核酶也應(yīng)該有一個交點。

其次,在低溫下,酶的活性也會受到抑制,由于它的分子結(jié)構(gòu)沒有被破壞,所以在適宜的條件下可以恢復(fù),而在日常生活中也可以利用這一點來保存酶,而從《生物化學(xué)簡明教程》的上述插圖可以看出,左側(cè)是從原點開始的,也就是說有一個交點。蛋白質(zhì)類的酶在低溫下一般不會發(fā)生變性,但活性極低,甚至可以低到難以檢測的程度,RNA酶在低溫下的活性也可能會很低,因此,給出這個交點倒是能夠讓人理解的。但酶在高溫下會發(fā)生變性,變性以后酶的活性大部分將會完全喪失,最適作用溫度高溫一側(cè)也必定存在一個交點,不給出這個交點無法讓人理解。

第三,酶的最適作用溫度不是一個固定不變的常數(shù),其數(shù)值受到底物、種類、作用等因素的影響而改變,例如,酶的作用時間長短不同,所求的最適作用溫度亦不同,作用時間愈長,最適作用溫度愈低,作用時間愈短,最適作用溫度則愈高。其實只有在一定的條件下各種酶才有其一定的最適作用溫度,通常動物體內(nèi)酶的最適作用溫度在37-50℃,植物體內(nèi)的酶的最適作用溫度在50-60℃。

第四,和一般化學(xué)反應(yīng)相同,酶的反應(yīng)在一定的溫度范圍0-40℃內(nèi),其速度隨溫度的升高而升高,根據(jù)一般經(jīng)驗每升高10℃的反應(yīng)速度增加一倍,高溫下酶易失活,絕大多數(shù)酶在60℃即失去活性,故此,最適作用溫度的右側(cè)下降的幅度應(yīng)該較大,左側(cè)上升的幅度應(yīng)該相對較慢,曲線的兩側(cè)也應(yīng)該不會程明顯的對稱。

綜上所述,酶在一定的條件下有一個最適溫度,并且在最適溫度兩側(cè)應(yīng)該是不對稱,左側(cè)和橫坐標(biāo)無限接近,右側(cè)和橫軸在某一位置有一個交點。所以酶受溫度的影響曲線應(yīng)該大體上是這樣一個趨勢:

當(dāng)然,蛋白酶和核酶在特性上有一定的差異,曲線也應(yīng)該有所變動。

另外,從曲線上無法直接反映出來的是,蛋白質(zhì)的變性作用如不過于劇烈,是一種可逆反應(yīng)。這一點在教學(xué)過程中往往也無法作出解釋。例如,胃蛋白酶加熱至80-90℃時,失去溶解性,也無消化的能力,如將溫度再降低到點37℃則它又可恢復(fù)溶解性與消化蛋白的能力,但隨著變性時間的增加、條件的加劇,變性程度也加深,如蛋白質(zhì)的結(jié)絮作用和凝固作用就是變性程度深刻化,這樣就達(dá)到不可逆的變性。這些也絕不是一個圖就可以說明的。當(dāng)然上述是筆者的一孔之見,錯誤在所難免,請各位同仁不吝賜教。

參考文獻(xiàn):

1.全日制普通高級中學(xué)教科書《生物》必修第一冊,人民教育出版社自然編著室編著

2.《生物化學(xué)簡明教程》高等教育出版社第三版由羅紀(jì)盛等編著

篇（3）

納米材料表面能量轉(zhuǎn)移（Nanomaterials surface energy transfer，NSET）在分析化學(xué)及生物藥物分析等領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用，如示蹤DNA或蛋白質(zhì)分子的構(gòu)象改變，識別DNA折疊的中間產(chǎn)物，監(jiān)測DNA與金屬離子的相互作用以及測定與疾病相關(guān)的重要生物分子＼[1～4＼]。在本質(zhì)上，NSET是偶極偶極相互作用，它與熒光共振能量轉(zhuǎn)移（Fluorescence resonance energy transfer，F(xiàn)RET）的不同之處在于NSET的能量受體是納米粒子表面，其通過在幾何學(xué)上各向同性的偶極向量分布接受供體的能量。NSET增大了供受體之間的能量轉(zhuǎn)移效率，相比FRET，它具有兩個重要特點＼[5，6＼]：同一個納米粒子能猝滅從可見到近紅外發(fā)射波長的熒光；能量轉(zhuǎn)移效率與距離的關(guān)系從1/R6變成1/R4，使得NSET的有效作用距離（約15 nm）比FRET（9 nm）增大了約2倍＼[6＼]。

鉛污染是一種分布廣泛的重金屬污染，它能導(dǎo)致人體腎臟損傷和智力發(fā)育遲滯＼[7＼]。因此，發(fā)展簡單靈敏的實時監(jiān)測環(huán)境中Pb2+污染的方法意義重大。目前，基于脫氧核酶的鉛離子傳感器由于其高靈敏度和高選擇性被廣泛地用于測定水中Pb2+ ＼[8～14＼]。例如Lu等利用脫氧核酶建立了一系列比色法＼[10～12＼]和熒光共振能量轉(zhuǎn)移法＼[13＼]用于測定Pb2+。Pb2+脫氧核酶是由一個酶及底物鏈構(gòu)成，當(dāng)Pb2+存在時，脫氧核酶可以催化底物鏈發(fā)生特異性的水解斷裂。這一特性常被用來控制納米粒子聚集和熒光共振能量轉(zhuǎn)移供受體之間的距離。在這些方法中，靈敏度和選擇性都較好，但是由于所用脫氧核酶發(fā)生特異性水解斷裂的過程需要嚴(yán)格的反應(yīng)條件，使得操作過程比較復(fù)雜。

研究發(fā)現(xiàn)，Pb2+由于具有與G四鏈體結(jié)構(gòu)空腔尺寸適合的離子半徑（r =0.129 nm）以及與堿基的強配位作用，能與富含G堿基的寡聚核苷酸鏈形成穩(wěn)定的G四鏈體結(jié)構(gòu)＼[15＼]。近來有研究報道，凝血酶適配體（Thrombinbinding aptamer，TBA，5′GGT TGG TGT GGT TGG3′） 就可以選擇性地與Pb2+形成G四鏈體＼[16＼]。本研究中在TBA DNA的5′端修飾上熒光染料FAM作為能量供體，利用檸檬酸根穩(wěn)定的球形金納米粒子作為能量受體，通過表面能量轉(zhuǎn)移建立了測定水溶液中Pb2+的分析方法。在Pb2+誘導(dǎo)下，該DNA鏈從自由纏繞狀態(tài)轉(zhuǎn)變成G四鏈體。由于單鏈DNA和G四鏈體的DNA（或雙鏈DNA）具有不同的靜電特性，對金納米粒子具有不同的吸附能力＼[17＼]。因此，與Pb2+濃度相關(guān)的DNA折疊過程會改變金納米粒子與染料分子之間的距離，從而影響兩者之間的能量轉(zhuǎn)移效率，具體體現(xiàn)在染料熒光強度的變化。本方法通過監(jiān)測體系的熒光強度變化就可以簡單靈敏地實現(xiàn)對Pb2+的定量檢測。

2實驗部分

2.1儀器與試劑

Hitachi F2500型熒光分光光度計（日本日立公司），以485 nm激發(fā)，500～600 nm 之間掃描熒光發(fā)射光譜。Shimadzu UV3600 型紫外可見近紅外分光光度計（日本島津公司）；PHS3C 型酸度計（成都世紀(jì)方舟科技開發(fā)公司）； QL901型漩渦混合器（江蘇其林貝爾儀器制造有限公司）； 901型恒溫磁力攪拌器（上海精科實業(yè)有限公司）。

HAuCl4?4H2O（上海國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；檸檬酸三鈉（上?；瘜W(xué)試劑公司）；Pb（NO3）2（重慶川東化工試劑公司）；熒光素修飾的單鏈DNA（5′FAMGGT TGG TGT GGT TGG3′，上海生工生物工程技術(shù)與服務(wù)有限公司合成）。將DNA干粉以5000 r/min離心5 min后，加入1 mL新煮沸并冷卻的超純水混勻，4 ℃下保存待用。實驗用水均為超純水（重慶利迪現(xiàn)代水技術(shù)設(shè)備有限公司LD50GE型超純水機制備，18.2 MΩ cm）。實驗中使用三羥甲基氨基甲烷乙酸（TrisHAc）緩沖溶液控制溶液酸度。試劑均為分析純。

2.2實驗方法

2.2.1金納米粒子（AuNPs）的合成根據(jù)文獻(xiàn)＼[18＼] 的方法稍作修改合成了檸檬酸根穩(wěn)定的AuNPs。具體步驟為：在100 mL 平底燒瓶中依次加入49 mL 超純水，1 mL 1% HAuCl4，磁力攪拌下加熱至沸騰；劇烈攪拌下迅速加入1 mL 5% 檸檬酸三鈉，溶液的顏色變?yōu)闇\黃色；繼續(xù)磁力攪拌并使溶液保持沸騰，5 min內(nèi)可觀察到溶液的顏色從淺黃色經(jīng)由藍(lán)黑色，最終轉(zhuǎn)變?yōu)轷r紅色；停止加熱，繼續(xù)攪拌直至溶液冷卻至室溫。測得該溶液的LSPR峰最大吸收波長在520 nm處。其濃度依照LSPR消光光譜和朗伯

3結(jié)果與討論

3.1NSET傳感法檢測鉛離子的原理

因而與AuNPs之間具有強烈的親和力，使得TBA很容易被吸附到金納米粒子表面＼[17＼]。通過TBA在金納米粒子表面的吸附，修飾于TBA上的FAM染料分子可以靠近金納米粒子，發(fā)生從FAM到金納米粒子表面的能量轉(zhuǎn)移，使得FAM染料的熒光被猝滅。當(dāng)加入Pb2+后，TBA由于含有9個G堿基，它們能與Pb2+特異性結(jié)合，使TBA從自由纏繞結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變?yōu)镚四鏈體。由于G四鏈體中暴露在外的是帶負(fù)電荷的磷酸鹽骨架，它們與帶負(fù)電荷的金納米粒子之間能產(chǎn)生強烈的靜電排斥力＼[17＼]，顯著增加了TBA上攜帶的染料分子與金納米粒子之間的距離，減弱了染料分子與金納米粒子之間的表面能量轉(zhuǎn)移，體系的熒光信號得到恢復(fù)。在一定范圍內(nèi)，形成四鏈體的程度與Pb2+加入濃度成正比，使得體系的熒光強度也與Pb2+濃度成正比，據(jù)此建立了基于表面能量轉(zhuǎn)移的分析方法用于定量測定水中的Pb2+的方法。

為了示蹤Pb2+引起的TBA構(gòu)象改變以及與AuNPs之間的表面能量轉(zhuǎn)移，利用普通的熒光分光光度計分別測定Pb2+存在與否情況下修飾于TBA鏈上的FAM的熒光強度（圖2）。從圖2可見，在沒有AuNPs和Pb2+存在情況下，F(xiàn)AMTBA在520 nm處展示出很強的熒光發(fā)射（圖2a）；當(dāng)加入AuNPs后，由于AuNPs與FAM之間有效的表面能量轉(zhuǎn)移，F(xiàn)AMTBA的熒光幾乎被完全猝滅（圖2c）。這一現(xiàn)象與文獻(xiàn)＼[21＼]所觀察到的金納米粒子對熒光團有較高猝滅效率是一致的。而當(dāng)Pb2+和AuNPs均被加入體系中時，由于Pb2+誘導(dǎo)FAMTBA的構(gòu)象發(fā)生改變，使得FAM與AuNPs的距離大大增加，降低了表面能量轉(zhuǎn)移的效率，從而使熒光得到一定程度的恢復(fù)（圖2b），據(jù)此實現(xiàn)對Pb2+的檢測。

3.2其它金屬離子的響應(yīng)3.3線性范圍及實際應(yīng)用

在最優(yōu)實驗條件下，利用TBA探針基于表面能量轉(zhuǎn)移選擇性測定Pb2+。在Pb2+濃度為12.5～100 nmol/L范圍內(nèi)，獲得了熒光恢復(fù)效率（F/F0）與Pb2+濃度間的線性關(guān)系，線性回歸方程為y=0.910+0.007c （y為體系的熒光恢復(fù)效率F/F0，c為Pb2+濃度（nmol/L）， R2=0.997，圖4），檢出限（3σ）為10 nmol/L。 依據(jù)美國環(huán)境保護(hù)署（EPA）規(guī)定的飲用水中Pb2+濃度不得高于0.015 mg/L （折合72 nmol/L）的標(biāo)準(zhǔn)＼[13＼]，本方法對Pb2+的線性響應(yīng)范圍正好可用于監(jiān)測飲用水中Pb2+的含量。采用標(biāo)準(zhǔn)樣品加入法，對自來水中Pb2+進(jìn)行定量檢測。為避免次氯酸鹽的強氧化性對實驗的干擾，在分析之前，自來水需先煮沸。實驗結(jié)果見表1，標(biāo)準(zhǔn)加入回收率結(jié)果令人滿意。

4結(jié)論

通過Pb2+誘導(dǎo)FAMTBA形成G四鏈體，并基于FAM與AuNPs之間的表面能量轉(zhuǎn)移，建立了一種簡單、快速、靈敏的Pb2+傳感方法。在最佳實驗條件下，其檢測線性范圍為12.5～100 nmol/L，檢出限（3σ）為10 nmol/L。美國環(huán)境保護(hù)署（EPA）規(guī)定飲用水中Pb2+濃度不得高于0.015 mg/L （折合72 nmol/L），故本方法可用于監(jiān)測自來水中的Pb2+。

4LIU Chun， WU Tong， HUANG ChengZhi. Sci. China Ser. B， 2010， 40（5）： 531-537

劉 春， 吳 同， 黃承志. 中國科學(xué)B： 化學(xué)， 2010， 40（5）： 531-537

5Griffin J， Singh A K， Senapati D， Rhodes P， Mitchell K， Robinson B， Yu E， Ray P C. Chem. Eur. J.， 2009， 15（2）： 342-351

6Jennings T L， Singh M P， Strouse G F. J. Am. Chem. Soc.， 2006， 128（16）： 5462-5467

7Bridgewater B M， Parkin G. J. Am. Chem. Soc.， 2000， 122（29）： 7140-7141

8Wei H， Li B， Li J， Dong S， Wang E. Nanotechnology， 2008， 19： 095501

9GAO XiaoXia， JIA YuHua， YANG JinFeng， LI JiShan， YANG RongHua. Chinese J. Anal. Chem.， 2013， 41（5）： 670-674

高曉霞， 賈玉華， 楊金鳳， 李繼山， 楊榮華. 分析化學(xué)， 2013， 41 （5）： 670-674

10Liu J， Lu Y. J. Am. Chem. Soc， 2003， 125（22）： 6642-6643

11Mazumdar D， Liu J， Lu G， Zhou J， Lu Y. Chem. Commun.， 2010， 46（9）： 1416-1418

12Wang Z， Lee J H， Lu Y. Adv. Mater.， 2008， 20： 3263-3267

13Lan T， Furuya K， Lu Y. Chem. Commun.， 2010， 46（22）： 3896-3898

14ZHAO YongXi， QI Lin， YANG WeiJun， WEI Shuai， WANG YaLing. Chinese J. Anal. Chem.， 2012， 40（8）： 1236-1240

趙永席， 齊 林， 楊衛(wèi)軍， 魏 帥， 王亞玲. 分析化學(xué)， 2012， 40（8）： 1236-1240

15Kotch F W， Fettinger J C， Davis J T. Org. Lett.， 2000， 2（21）： 3277-3280

16Liu C W， Huang C C， Chang H T. Anal. Chem.， 2009， 81： 2383-2387

17Li H， Rothberg L. Proc. Natl. Acad. Sci. USA， 2004， 101（39）： 14036-14039

18Chen S J， Chang H T. Anal. Chem.， 2004， 76（13）： 3727-3734

19Huang C C， Huang Y F， Cao Z， Tan W， Chang H T. Anal. Chem.， 2005， 77： 5735-5741

20Li T， Wang E， Dong S. Anal. Chem.， 2010， 82（4）： 1515-1520

21Jennings T L， Schlatterer J C， Singh M P， Greenbaum N L， Strouse G F. Nano Lett.， 2006， 6（7）： 1318-1324

22Nagatoishi S， Nojima T， Galezowska E， Juskowiak B， Takenaka S. ChemBioChem.， 2006， 7： 1730-1737

篇（4）

21世紀(jì)是生物科學(xué)高速發(fā)展的時代，生命科學(xué)新突破、新進(jìn)展引發(fā)人們對生命現(xiàn)象的持續(xù)關(guān)注，生物工程技術(shù)的應(yīng)用使人們的生活發(fā)生了很大的變化，同時給社會生產(chǎn)帶來了重大革新，這所有的變化都與生物化學(xué)學(xué)科的發(fā)展密切相關(guān)。生物化學(xué)是生物學(xué)各專業(yè)學(xué)生必修的一門專業(yè)基礎(chǔ)課程，學(xué)生對這門課程的掌握程度直接影響對其他課程的接受情況，生物化學(xué)被列為很多專業(yè)如生物類、農(nóng)業(yè)類、醫(yī)學(xué)類等的考研或其他專業(yè)考試的科目，所以對該課程的掌握情況直接關(guān)系到學(xué)生的考研和就業(yè)。以全面培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新能力和綜合素質(zhì)為目標(biāo)，該課程在教學(xué)隊伍、教學(xué)內(nèi)容、教學(xué)條件、教學(xué)方法與手段、教學(xué)網(wǎng)站建設(shè)、實驗教學(xué)、教學(xué)質(zhì)量和水平、科研等方面都取得了長足進(jìn)展，逐漸形成了自己的特色和優(yōu)勢。2011年，生物化學(xué)被立項為臨沂大學(xué)校級精品課程，2012年被立項為山東省省級精品課程。讓學(xué)生在有限的時間內(nèi)系統(tǒng)掌握生物化學(xué)知識和技能是教學(xué)的重要任務(wù)，然而在對2013級生物科學(xué)和生物技術(shù)專業(yè)學(xué)生的生物化學(xué)學(xué)習(xí)情況調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，多數(shù)學(xué)生存在講授內(nèi)容不能完全掌握、學(xué)習(xí)興趣不高等問題。在分析原因的過程中發(fā)現(xiàn)在理論和實驗教學(xué)中依舊存在一些問題。為了有效激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，培養(yǎng)其創(chuàng)新思維和實驗?zāi)芰Γ瑪M進(jìn)一步深化教學(xué)改革，全面提高教育教學(xué)質(zhì)量，現(xiàn)分析如下。

一、目前本課程所面臨的問題

1.生物化學(xué)教材存在更新速度慢和部分重復(fù)的問題。目前生物化學(xué)課程所用教材門類繁多，但多數(shù)只重視生命的本質(zhì)、生命的基本過程和基本規(guī)律，局限于以傳統(tǒng)的靜態(tài)生化、動態(tài)生化、機能生化為主的內(nèi)容，而對生物化學(xué)的重大進(jìn)展的重視不夠。生物化學(xué)課程的實用性很強，新概念、新成就、新技術(shù)層出不窮，這些都沒有體現(xiàn)在教材中，大大落后于學(xué)科的發(fā)展。生物化學(xué)還存在教學(xué)內(nèi)容重復(fù)的問題，如糖、脂和維生素化學(xué)在無機化學(xué)和有機化學(xué)等課程中已經(jīng)涉及其中大部分內(nèi)容，而遺傳物質(zhì)和蛋白質(zhì)的生物合成及基因表達(dá)調(diào)控等與分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、基因工程等課程有部分重復(fù)。

2.生物化學(xué)實驗教學(xué)所占比例偏低，且驗證性實驗所占比例大。據(jù)統(tǒng)計，國外知名院校多單獨開設(shè)生物化學(xué)實驗課程，且實驗學(xué)時數(shù)與理論時數(shù)的比例在1.0以上，本校生物化學(xué)實驗學(xué)時較少，學(xué)時比為0.5左右。由于實驗學(xué)時少，且驗證性實驗所占比例大，如考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)含量、酵母RNA分離及組分鑒定等，而綜合性、開放性實驗所占比例小，學(xué)生普遍欠缺創(chuàng)新、設(shè)計能力，抑制了學(xué)生的主觀能動性，束縛其科學(xué)思維能力的發(fā)展，非常不利于實驗?zāi)芰Φ呐囵B(yǎng)。

3.實驗教學(xué)方法單一。生物化學(xué)實驗教學(xué)長期依附于理論教學(xué)而沒有受到應(yīng)有的重視。教學(xué)方法以傳統(tǒng)講授形式為主，很少進(jìn)行問題引導(dǎo)，課堂上以教師為主體，在學(xué)生動手實驗前，教師從實驗原理、方法、步驟、注意事項，甚至實驗過程中可能出現(xiàn)的問題都進(jìn)行詳細(xì)講解，學(xué)生被動接受知識，照搬照做、步步模仿。教師在講授過程中多以單一板書的形式進(jìn)行，多媒體網(wǎng)絡(luò)化教學(xué)手段沒有或很少應(yīng)用，且沒有發(fā)揮出現(xiàn)代化教學(xué)手段的特色。

二、生物化學(xué)理論教學(xué)的優(yōu)化———將生命科學(xué)最新進(jìn)展與現(xiàn)有理論體系有機融合

為了解決生物化學(xué)教學(xué)內(nèi)容陳舊、與其他學(xué)科存在內(nèi)容重復(fù)的問題，許多學(xué)者提出了相應(yīng)的解決方法。劉堰和肖訓(xùn)焰提出教學(xué)內(nèi)容要與時俱進(jìn)，具體指出在緒論中增加生物化學(xué)研究工作的現(xiàn)狀與未來、在核酸化學(xué)中增加核酸的序列測定等內(nèi)容。刪除蛋白質(zhì)化學(xué)中蛋白質(zhì)的分類，維生素和輔酶中維生素的概念。胡曉倩等提出，學(xué)生在掌握生物化學(xué)基本知識和技能的基礎(chǔ)上，要了解學(xué)科發(fā)展的前沿知識與高新技術(shù)。謝珍玉和郭偉良具體提出講授內(nèi)容的重點部分，部分章節(jié)分配到其他學(xué)科中進(jìn)行重點講解。生物化學(xué)教學(xué)內(nèi)容的修改不是簡單的增刪或?qū)⒉糠终鹿?jié)分配到其他學(xué)科中講述，在增刪內(nèi)容的同時需要解決該課程與其他課程內(nèi)容的自然銜接問題，待添加的生命科學(xué)最新進(jìn)展內(nèi)容要與生物化學(xué)現(xiàn)有知識體系有機融合。如在講述基因調(diào)控的章節(jié)中向?qū)W生介紹該研究領(lǐng)域的新熱點———微RNA（microRNAs）。讓學(xué)生了解microRNAs是由非蛋白編碼基因轉(zhuǎn)錄物形成的莖環(huán)結(jié)構(gòu)前體，由核酶剪切，成熟后形成長度為20～25nt的小RNA分子；真核生物、原核生物和病毒都可以編碼mi-croRNAs；與教學(xué)內(nèi)容中出現(xiàn)的小分子干擾RNA進(jìn)行對應(yīng)比較；通過講述microRNAs的調(diào)控機制、功能、研究技術(shù)與方法、應(yīng)用和前景使學(xué)生了解生命科學(xué)中該領(lǐng)域的最新發(fā)展趨勢。

三、生物化學(xué)實驗教學(xué)改革———圍繞國計民生的熱點問題設(shè)計實驗

加大生物化學(xué)實驗教學(xué)中綜合性、開放性實驗的比例，由培養(yǎng)學(xué)生基本實驗技能為“指揮棒”的教學(xué)模式逐漸轉(zhuǎn)變到培養(yǎng)學(xué)生創(chuàng)新性思維的模式中來。趙云濤等提出實驗項目分為基礎(chǔ)性、綜合性、設(shè)計型和創(chuàng)新型實驗。韓寒冰和劉杰鳳提出加強自主性實驗和研究性實驗教學(xué)、培養(yǎng)學(xué)生創(chuàng)新性能力的觀點。在培養(yǎng)創(chuàng)新應(yīng)用型人才為目標(biāo)的培養(yǎng)模式下，開展綜合性、開放性實驗的需求越來越迫切。開設(shè)這類實驗的目的是拉近理論和實際應(yīng)用的距離，讓學(xué)生了解所學(xué)知識綜合起來可用來解決實際問題，從而激發(fā)其創(chuàng)新思維，培養(yǎng)其創(chuàng)新能力。在考慮到理論與實驗課程一致性和對應(yīng)性的基礎(chǔ)上，圍繞國計民生的熱點問題設(shè)計綜合性、開放性實驗作為實驗教學(xué)改革的切入點，可用以解決教學(xué)中課堂與實驗室、理論與實踐相脫節(jié)的問題，并能實現(xiàn)各基礎(chǔ)實驗項目的有機結(jié)合。如2013年3月份報道臨沂部分地區(qū)冬小麥出現(xiàn)嚴(yán)重病害，表現(xiàn)為受害小麥葉片發(fā)黃、枯萎、矮化，嚴(yán)重地塊小麥完全枯死，導(dǎo)致這種病害的原因是小麥黃花葉病毒的侵染。據(jù)此設(shè)計小麥總RNA的提取及小麥黃花葉病毒檢測的實驗。提取小麥總RNA方法為實驗室常規(guī)TRIzol法，通過植物總RNA提取實驗使學(xué)生掌握核酸的基本組成、熟悉移液槍、離心機、研磨器的使用，讓學(xué)生理解RNA提取對實驗條件要求很高，原因是RNA酶無處不在，RNA易被RNA酶降解。隨后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄及RT-PCR，以小麥黃花葉病毒的特異性引物進(jìn)行擴增，獲得目的大小的特異性條帶。在實驗的過程中使學(xué)生掌握反轉(zhuǎn)錄、RT-PCR及瓊脂糖凝膠電泳等一系列生物化學(xué)基本操作。通過這類實踐性強的實驗將原有各自獨立的實驗統(tǒng)一到同一實驗材料和同一題目下，實現(xiàn)各基礎(chǔ)實驗項目的有機結(jié)合，體現(xiàn)出知識的系統(tǒng)性和實驗的研究性，同時同一題目下的各個小實驗一步緊連一步，增強學(xué)生的研究興趣。

四、生物化學(xué)實驗教學(xué)方法的改革———由單一到多元化的教學(xué)方法

近五年來，我校實驗中心引進(jìn)一批具有博士學(xué)位的高學(xué)歷人才作為實驗員，這為生物化學(xué)實驗教學(xué)改革注入了新的活力。這些實驗員以直接或間接的方式參與生物化學(xué)實驗教學(xué)，可緩解緊張的教師資源，并且他們知識豐富、思路開闊、創(chuàng)造能力強、創(chuàng)新欲望高，能大大提高實驗教學(xué)質(zhì)量。在實驗教學(xué)過程中，實驗員與本科生的年齡差別不大，興趣愛好相近，他們之間交流較容易和順暢，重要的是他們知道學(xué)生最想了解的是什么，能在相對輕松的環(huán)境中交流實驗心得，討論問題。對有獨特想法的學(xué)生，在實驗員及教師的指導(dǎo)下進(jìn)一步深入研究，獲得更多的鍛煉。在進(jìn)行實驗教學(xué)方法改革的過程中，孔繁華等提出實驗課“3+1”的教學(xué)方法；舒樂新等以啟發(fā)式、歸納式、問題式、討論式等教學(xué)法，讓學(xué)生成為教學(xué)的主體，激發(fā)他們的主動性和創(chuàng)造性。在進(jìn)行實驗教學(xué)方法改革過程中以傳統(tǒng)教學(xué)方法與現(xiàn)代多媒體技術(shù)相結(jié)合的手段，直觀、生動地向?qū)W生展示實驗內(nèi)容，充分調(diào)動其積極性。采用啟發(fā)式等的常規(guī)教學(xué)方法，要求學(xué)生在教師的啟發(fā)下獨立完成實驗準(zhǔn)備、實施與總結(jié)，引導(dǎo)學(xué)生獨立思考、發(fā)現(xiàn)問題、解決問題，培養(yǎng)學(xué)生創(chuàng)新能力，形成開放式、互動式的教學(xué)模式。

五、結(jié)語

教學(xué)改革的目的是要增強學(xué)生素質(zhì)的培養(yǎng)，加強對學(xué)生獲得知識、運用知識的能力。通過改革優(yōu)化，調(diào)整理論課程內(nèi)容，使學(xué)習(xí)內(nèi)容具有基礎(chǔ)性、現(xiàn)實性和現(xiàn)代性。在理論與實驗教學(xué)內(nèi)容對應(yīng)的前提下，以社會中的熱點問題設(shè)計實驗，將理論學(xué)習(xí)中的各種基礎(chǔ)問題連貫起來，提高學(xué)生創(chuàng)新能力和實踐興趣。在精心調(diào)整生物化學(xué)教學(xué)內(nèi)容的過程中，以新穎的實驗教學(xué)方法實現(xiàn)實驗教學(xué)效果的優(yōu)化。生物化學(xué)內(nèi)容復(fù)雜繁多，通過課程改革，學(xué)生在學(xué)習(xí)中得心應(yīng)手，會促進(jìn)其對其他課程的學(xué)習(xí)乃至對未來都會充滿信心，這將非常有利于學(xué)生的人生發(fā)展，而這樣的前景激勵著我們在生物化學(xué)課程改革的道路上不斷前進(jìn)。

作者:王瑩 王浩 井文倩 郗冬梅 單位:臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 臨沂羅西小學(xué) 臨沂大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院

參考文獻(xiàn)：

篇（5）

【關(guān)鍵詞】 乙型肝炎病毒；DNA定量；溶血；PCR

血清中乙型肝炎病毒DNA水平是判斷乙型肝炎病毒在體內(nèi)是否復(fù)制，患者傳染性高低及選擇治療方案的重要指標(biāo)。目前臨床一般采用實時熒光定量PCR技術(shù)對乙型肝炎病毒DNA拷貝數(shù)進(jìn)行定量檢測。實時熒光定量PCR技術(shù)融匯了PCR技術(shù)的高效擴增，探針技術(shù)的高特異性，光譜技術(shù)的高敏感性等優(yōu)點，通過直接檢測PCR過程中熒光信號的變化以獲得定量的結(jié)果。但此技術(shù)可能與標(biāo)本狀態(tài)密切相關(guān)，如溶血、脂血等。有研究表明Hb及其代謝產(chǎn)物可能與Taq酶相互作用，進(jìn)而抑制Taq酶的活性，使PCR擴增效率明顯降低，導(dǎo)致定量測定結(jié)果偏低［1］。在臨床檢驗標(biāo)本中，溶血標(biāo)本較為常見，究竟溶血到何種程度會對乙型肝炎病毒DNA定量結(jié)果產(chǎn)生影響？本文將探討不同程度溶血對乙型肝炎病毒DNA定量檢測的影響。

對象與方法

1.對象 我們收集了ALT＞40 U/L、HBsAg陽性、HBeAg陽性、HBcAb陽性的乙型肝炎患者30例，其中男性17例，女性13例，年齡在18～53歲之間。

2.試劑 深圳匹基公司提供的乙型肝炎病毒DNA檢測試劑盒（批號：20070501）、乙型肝炎病毒DNA陽性標(biāo)準(zhǔn)品。

3.儀器 BECKMAN全自動血球計數(shù)儀（型號：Coulter Ac.Tdiffe）、Lightcycle熒光PCR擴增儀(羅氏公司)、高速低溫離心機（Sigma公司）、干式恒溫器（杭州藍(lán)焰科技有限公司）、低溫冰箱（SANYO公司）。

4. 方法

（1）模擬溶血標(biāo)本的制備：抽取30例乙型肝炎患者血液后，2小時內(nèi)離心分離血清，這種不含Hb的血清作為無Hb對照組，然后取每位患者600 μl血清及適量紅細(xì)胞混合，置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。次日將含紅細(xì)胞的血清管取出放于室溫解凍，完全解凍后再將該管置于-20℃冷凍，如此反復(fù)凍融兩次，使得RBC完全破裂，釋放出Hb。在Coulter全自動血球計數(shù)儀測定每管紅細(xì)胞裂解后的Hb濃度，再用每位患者的血清稀釋，使得Hb終濃度為4 g/L、8 g/L、16 g/L、32 g/L，這些標(biāo)本即為模擬溶血標(biāo)本。

（2）乙型肝炎病毒DNA模板制備：取待測樣本及陰、陽性對照（試劑盒備有）各100 μl，分別加入到0.5 ml的離心管中，再分別加入100 μl DNA提取液1，震蕩混勻，13000 rpm離心10 min；吸棄上清液，再加入25 μl提取液2，震蕩至沉淀完全散開，100℃干浴10 min；冷至室溫后，13000 rpm離心10 min，保留上清液備用。

（3）PCR擴增：從試劑盒中取出乙型肝炎病毒DNA擴增反應(yīng)液、Taq酶及UNG，室溫融化后按規(guī)定比例混合均勻，根據(jù)試劑盒說明書配置反應(yīng)液，分裝于Roche毛細(xì)擴增管中，每次實驗均設(shè)2管陰性對照，1管強陽性對照，1管臨界陽性對照， 4管乙型肝炎病毒陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品，其拷貝數(shù)分別為〗5.0×104、5.0×105、5.0×106、5.0×107拷貝/ml，將上述對照及樣本各加2 μl于加好反應(yīng)液的Roche毛細(xì)管中，短暫離心后上機擴增。對檢測結(jié)果高于5.0×107拷貝/ml的標(biāo)本進(jìn)行稀釋后再擴增，使其結(jié)果落在試劑盒檢測線形范圍內(nèi)。

（4）核酸擴增與熒光數(shù)據(jù)采集：擴增條件設(shè)置為37℃孵育3分鐘； 94℃變性1分鐘；再進(jìn)入40個循環(huán)，每一個循環(huán)包括92℃變性5秒，60℃退火及延伸30秒，在60℃時單點收集熒光信號；儀器檢測通道選擇F1通道。

（5）分析條件設(shè)定：選擇F1通道，點擊Quantification進(jìn)入定量分析窗口，設(shè)定Analysis方式為proportional，選定Noise bank項，閾值選定為剛好超過陰性對照品擴增曲線的最高點，且Ct值不出現(xiàn)任何數(shù)據(jù)為準(zhǔn)。

（6）數(shù)據(jù)分析：四個陽性標(biāo)準(zhǔn)品Ct值均須小于38.0，標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合度須小于-0.980，陰陽對照品擴增須符合預(yù)期要求，得出的待測樣品的拷貝數(shù)才為可信結(jié)果。

5.統(tǒng)計學(xué)處理 將測得的乙型肝炎病毒DNA拷貝數(shù)轉(zhuǎn)換成常用對數(shù)，再利用SPSS軟件包進(jìn)行統(tǒng)計，各含Hb的血清組與無Hb的血清組間差異采用配對t檢驗進(jìn)行差異性檢驗。

結(jié)果

Hb為4、8、16、及32 g/L的血清組中乙型肝炎病毒DNA拷貝數(shù)與無Hb的血清組分別進(jìn)行配對t檢驗，P值均大于0.05，因此每一組含Hb的乙型肝炎病毒DNA拷貝數(shù)與不含Hb的血清組均無顯著性差異。見表1。

表1 各組乙型肝炎病毒DNA拷貝數(shù)及統(tǒng)計量（略）

討論

實時熒光定量PCR技術(shù)檢測乙肝病毒DNA已在臨床廣泛使用，但在臨床應(yīng)用中，影響的因素也較多，如實驗室條件，操作人員的技術(shù)，臨床標(biāo)本的狀態(tài)等。一些研究認(rèn)為溶血標(biāo)本對FQPCR技術(shù)檢測乙肝病毒DNA有影響，但也有研究認(rèn)為這種影響并不顯著［2］。本文通過模擬不同程度溶血標(biāo)本，認(rèn)為溶血達(dá)到32 g/L對檢測結(jié)果無顯著影響（P＞0.05）。陳英劍等認(rèn)為溶血至20 g/L時對檢測結(jié)果無影響，這與本文研究結(jié)論基本一致［3］。

本文將乙型肝炎患者抽血后2小時內(nèi)分離的血清作無Hb對照組，然后通過反復(fù)凍融使標(biāo)本溶血，再用乙型肝炎患者自身血清稀釋以獲得不同Hb濃度溶血標(biāo)本，在模擬不同程度溶血標(biāo)本過程中，不添加任何外來物質(zhì)，使檢測結(jié)果受外在因素影響程度減少到最低。實驗結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計處理后，發(fā)現(xiàn)溶血程度控制Hb的濃度在32 g/L以下時，對乙型肝炎病毒DNA的檢測結(jié)果無顯著影響（P＞0.05）。出現(xiàn)此結(jié)果的原因可能有兩個方面，一是在HBVDNA模板的提取過程中，標(biāo)本中的Hb經(jīng)100℃煮沸10分鐘后已經(jīng)變性沉淀，再經(jīng)離心后，待測樣本上清液中可能不會有Hb的存在，僅剩Hb的衍生物［4］。而且隨著提取方法的不斷改進(jìn)，提取液中對DNA聚合酶的干擾物質(zhì)不斷減少，去除Hb越來越徹底。另一方面FQPCR對乙肝病毒DNA定量檢測只是一種半定量方法，并不是對擴增后終產(chǎn)量進(jìn)行完全定量，它是根據(jù)樣本可檢測的起始擴增時間與標(biāo)準(zhǔn)品擴增曲線得出的半定量結(jié)果。本文收集的30例病人的血清中HBVDNA含量均大于107 拷貝/ml，樣本中HBVDNA含量較高，血清中HBVDNA含量小于107 拷貝/ml時，檢測結(jié)果是否有差異，尚需進(jìn)一步研究。且本文只對溶血程度小于32 g/L時進(jìn)行探討，溶血大于32 g/L時對檢測結(jié)果的影響，也需進(jìn)一步驗證再作結(jié)論。溶血程度達(dá)到32 g/L時已是肉眼非常清晰可見，臨床溶血樣本的溶血程度大多在32 g/L以下，因此我們認(rèn)為一般的溶血樣本可以接受。但需注意的是，本文只是對深圳匹基公司試劑進(jìn)行探討，不同廠家，可能因使用不同的提取液及提取方法而出現(xiàn)不同的結(jié)論，有文獻(xiàn)報道，使用PEG沉淀煮沸法和直接加熱煮沸法提取HBVDNA所得的定量結(jié)果有差異，因此不同提取方法對檢測結(jié)果有一定的影響［5］。一般而言廠家提供試劑時會給出較為清晰的影響試劑盒使用的各種因素，有能力的PCR實驗室在試劑使用前，可進(jìn)行此類評價實驗，制訂合適本實驗室使用標(biāo)本留取標(biāo)準(zhǔn)。隨著衛(wèi)生事業(yè)的發(fā)展，人們對檢驗質(zhì)量的的要求越來越高，但檢驗質(zhì)量不可避免的受較多因素影響，標(biāo)本質(zhì)量是重要的影響因素之一，如溶血、脂血、餐前、餐后等，對各項影響因素進(jìn)行量化研究，如溶血、脂血達(dá)到何程度時則定為不合格樣本，都應(yīng)該有明確的指標(biāo)。本文只對溶血程度小于32 g/L時進(jìn)行探討，溶血大于32 g/L時及血清中HBVDNA含量小于107 拷貝/ml拷貝時對檢測結(jié)果的影響，需進(jìn)一步驗證再作結(jié)論。

參考文獻(xiàn)

［1］黃 翔，王日軍，周志明，等.溶血和脂血標(biāo)本中乙肝病毒DNA提取方法的選擇與評價［J］.華中醫(yī)學(xué)雜志，2004，28（02）：123-124.

［2］李金明，王露楠. 樣本處理對聚核酶鏈反應(yīng)測定乙肝病毒核酸的的影響［J］.中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2000，23（6）：337-339.

篇（6）

藥品專利保護(hù)問題一直是我國醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展的薄弱環(huán)節(jié)。由于法規(guī)體系的不健全以及專利保護(hù)意識淡薄，使得許多原本我國擁有自主知識產(chǎn)權(quán)的成果都因此落得“為他人做嫁衣裳”的命運。這些教訓(xùn)告訴我們：要實現(xiàn)制藥大國向制藥強國的轉(zhuǎn)變，我們首先必須努力實現(xiàn)向藥品知識產(chǎn)權(quán)強國的轉(zhuǎn)變。因此，作為行政主體的政府和市場主體的企業(yè)都必須增強專利保護(hù)意識，而其中―個重要方面，就是要加強對專利保護(hù)制度的研究，尤其是國外先進(jìn)制度的研究，以取長補短。美國臨時專利申請規(guī)定是美國對其專利保護(hù)制度進(jìn)行創(chuàng)新的典型，對它進(jìn)行研究具有一定的積極意義。

1　美國的臨時專利申請規(guī)定

1．1 什么是臨時專利申請規(guī)定 臨時專利申請(provisionalpatentapplication，PPA)規(guī)定是美國專利商標(biāo)局于1995年6月9日在美國國內(nèi)率先提出實施的，是美國在烏拉圭回合談判之后，根據(jù)談判協(xié)議修改其專利法的產(chǎn)物。臨時專利申請規(guī)定主要涉及美國專利法的兩個條款，即第111條(b)款和第119條(e)款[1]。美國專利法第111條(b)款指出了與臨時專利申請相關(guān)的一些條件，即建立申請日需要提供說明書和附圖；維持申請日需要在規(guī)定的時間期限內(nèi)提交申請費和發(fā)明人姓名。第119條(e)款指出臨時專利申請(下文簡稱“臨時專利”)為申請人確立了一個優(yōu)先權(quán)，其保護(hù)期限是1年，在此期限和保護(hù)范圍內(nèi)，只有該“臨時專利”的持有人可以提出有關(guān)專利申請。但是，專利申請案以臨時申請的方式提出后，必須在1年內(nèi)正式向美國專利商標(biāo)局提交轉(zhuǎn)換請求書，將“臨時專利”轉(zhuǎn)為正規(guī)申請，否則此“臨時專利”在1年后自動失效。正規(guī)申請的內(nèi)容應(yīng)包含臨時專利申請的內(nèi)容和經(jīng)改寫后的內(nèi)容。

臨時專利申請規(guī)定所針對的對象主要是：已經(jīng)脫離基礎(chǔ)理論階段，具有應(yīng)用前景和潛在商業(yè)價值，但還不能申請專利的成果。如果一項成果的應(yīng)用前景還不明朗，可以先申請臨時專利，待進(jìn)一步研究后再申請正式專利。對于藥品而言，它可以有效地保護(hù)剛剛發(fā)現(xiàn)而尚未完全證明有效的藥物分子或藥靶[2]。

1．2　“臨時專利”的實質(zhì)相當(dāng)于“國內(nèi)優(yōu)先權(quán)”

筆者認(rèn)為，臨時專利不是真正意義上的專利，臨時專利不能予以審查，也無法授予專利權(quán)。實質(zhì)上，它僅僅是為申請人在將申請轉(zhuǎn)換為正規(guī)申請之前保留一個優(yōu)先權(quán)日，相當(dāng)于國內(nèi)優(yōu)先權(quán)，而這種較低成本的申請方式使得美國申請人與外國申請人享有烏拉圭回合談判的同等權(quán)利。

2　美國“臨時專利申請”規(guī)定與中國的“本國優(yōu)先權(quán)”規(guī)定的比較

臨時專利申請制度的本質(zhì)相當(dāng)于國內(nèi)優(yōu)先權(quán)。我國1992年修改后的《專利法》中第二十九條第二款對“本國優(yōu)先權(quán)”作出了規(guī)定：申請人于1992年1月1日以后在中國第一次提出發(fā)明或者實用新型專利申請(包括藥品和用化學(xué)方法獲得的物質(zhì)的專利申請以及食品、飲料和調(diào)味品的專利申請)之日起12個月內(nèi)，又向?qū)＠志拖嗤黝}提出專利申請的，可以享有優(yōu)先權(quán)。此后，我國于2002年修訂的《專利法實施細(xì)則》的第三十三條又對獲得本國優(yōu)先權(quán)的條件作出了具體規(guī)定：沒有要求過外國優(yōu)先權(quán)或者本國優(yōu)先權(quán)，即說明本國優(yōu)先權(quán)應(yīng)是首次使用而且只能適用一次；還未被專利局授予專利；不屬于按照規(guī)定提出的分案申請的。

由此可見，這兩種規(guī)定的相同之處，除了上述獲得本國優(yōu)先權(quán)的條件外，對有效期的規(guī)定都是12個月，如果12個月內(nèi)沒有提出第二次申請，則“臨時申請”或“在先申請”自動失效；此外，本國優(yōu)先權(quán)的客體都被嚴(yán)格限制為發(fā)明和實用新型。

2．1　“臨時專利”與“國內(nèi)優(yōu)先權(quán)”的積極意義

2．1．1　避免申請人在未獲得專利權(quán)的同時遭遇技術(shù)秘密公開

根據(jù)美國專利法的規(guī)定，約有10％的專利申請可以作為特例在專利授權(quán)前不予公開，其他的在18個月之后公開；我國專利法規(guī)定，所有的專利申請自申請日起第18個月應(yīng)予以公布。因此，通常情況下，如果專利申請人由于客觀條件的限制而對其發(fā)明創(chuàng)造的“三性”缺乏正確的估價，那么很有可能因不能通過實質(zhì)審查而無法獲得專利授權(quán)，但其技術(shù)秘密卻已經(jīng)公開了。然而，如果申請人運用國內(nèi)優(yōu)先權(quán)制度，預(yù)先進(jìn)行專利申請而取得申請日，然后，如果申請人能在12個月內(nèi)通過進(jìn)一步研究完善技術(shù)，達(dá)到專利授予的要求，則申請人可以要求優(yōu)先權(quán)，以避免在此期間別人的公開影響到自己發(fā)明創(chuàng)造的專利性；如果申請人在12個月內(nèi)沒有達(dá)到這些要求，還可以撤回在先申請，避免對其技術(shù)的公開。

2．1．2　有利于保護(hù)申請人的利益，鼓勵創(chuàng)新

何時提出專利申請最有利一直是人們關(guān)注的問題。過早申請專利，可能會由于一些技術(shù)問題尚未完全解決，難以通過專利的實質(zhì)審查；過晚申請專利又擔(dān)心他人占了先機。本國優(yōu)先權(quán)規(guī)定較好地解決了這一矛盾。申請人可以在成果還不是完全成熟時先提出申請，達(dá)到盡早保護(hù)自己的發(fā)明構(gòu)思與基本發(fā)明技術(shù)的目的，避免第三人在此期間搶注專利。在保留了一個較早的申請日之后，發(fā)明者有1年的時間來完善技術(shù)成果，在此期間還可以籌集實施該發(fā)明所需要的資金，必要時甚至還可以將成果市場化，以獲取經(jīng)濟效益。

2．1．3　有利于促進(jìn)發(fā)明人加快研究進(jìn)程

由于本國優(yōu)先權(quán)的期限是1年，這就在客觀上要求發(fā)明人必須在第一次申請之后的1年內(nèi)完成對相同主題的發(fā)明創(chuàng)造的完善工作。如果專利申請人既沒有在1年之內(nèi)完成相應(yīng)工作，也沒有采取更改專利保護(hù)方法的措施，那么就很可能因為高估了發(fā)明創(chuàng)造的價值，或者因他人在此期間對該項技術(shù)的公開行為而導(dǎo)致其無法獲得專利權(quán)。正是在這種制度的激勵下，發(fā)明者在第一次提出專利申請后，趕在本國優(yōu)先權(quán)期限屆滿前完成技術(shù)完善的工作，從而間接加速發(fā)明創(chuàng)造的進(jìn)程，推動科技的發(fā)展。

2．1．4　有利于減輕申請人的負(fù)擔(dān)

中美兩國專利法都規(guī)定專利的修改只能限定在原說明書記載的范圍內(nèi)，在申請之后所作的改進(jìn)與完善，通常只能作為新的申請?zhí)岢?。但一項發(fā)明創(chuàng)造往往會形成兩項前后關(guān)聯(lián)的專利，即后一專利是前一專利的改進(jìn)專利，而專利權(quán)人則要長期就同一發(fā)明創(chuàng)造支付兩件專利費用。本國優(yōu)先權(quán)允許申請人在1年的期限內(nèi)將相同主題的發(fā)明創(chuàng)造進(jìn)行完善，只發(fā)生一件專利費用，而且還允許將若干個臨時專利合并為一件正規(guī)專利申請，這在減輕專利權(quán)人的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)的同時，也調(diào)動了其進(jìn)行創(chuàng)新的積極性。

2．1．5　有利于提高專利申請的質(zhì)量，加強專利保護(hù)

一般來說，首次申請專利時，就技術(shù)本身而言，發(fā)明者對成果的認(rèn)識及其解決技術(shù)問題的方案等都有一定的局限性，背景技術(shù)資料也收集得不夠全面；另一方面，為了趕時間，在

申請文件的撰寫和保護(hù)范圍及權(quán)利要求的確定上，可能會考慮不周。而通過要求國內(nèi)優(yōu)先權(quán)，申請人與人能夠有較充足的時間對技術(shù)與專利保護(hù)的系列問題，甚至對市場上可能出現(xiàn)的相關(guān)問題，進(jìn)行較深入的研究分析。在此基礎(chǔ)上對第一次專利申請作出的修改、補充和完善，無論是從技術(shù)上還是從權(quán)利要求的層面來看，其專利的可靠性與穩(wěn)定性，相對來講都要好―些，一旦遇到侵權(quán)訴訟，勝訴的把握會更大一些。這對于加強專利的保護(hù)都是有利的。

2．2　美國臨時專利申請的積極意義

2．2．1　申請方式更簡易、快速

臨時專利申請可以先提出一個簡化的申請，這樣使申請人以較低的初始投資，贏得1年時間去評估發(fā)明的商業(yè)潛力。因此它規(guī)定，臨時專利申請不需撰寫完整的詳細(xì)說明書，不必辦理完整的申請文件，遞交申請時也只需滿足最低的形式要求。美國專利商標(biāo)局不對臨時專利申請的價值進(jìn)行評估，審批也比較簡單，而且其申請費用也比正式專利申請少得多。臨時專利申請只需要支付150美元，而正規(guī)申請申請費就是500美元，還不包括律師費、各種文書制作費用及權(quán)利要求等費用。我國《專利法實施細(xì)則》第三十二條規(guī)定，申請人要求優(yōu)先權(quán)手續(xù)的，應(yīng)當(dāng)在書面聲明中寫明第一次提出專利申請(以下稱在先申請)的申請日、申請?zhí)柡褪芾碓撋暾埖膰?；要求本國?yōu)先權(quán)的，申請人提交的在先申請文件副本應(yīng)當(dāng)由國務(wù)院專利行政部門制作。相對而言，我國的在先申請雖然較之于后一次申請的手續(xù)也相對簡單，費用也相對低廉，但比起美國臨時專利申請的規(guī)定來還是復(fù)雜了一些。

2．2．2　專利期限更長

美國專利法第154條(a)款中規(guī)定，依第119條內(nèi)容規(guī)定的臨時專利申請的優(yōu)先權(quán)不計人專利權(quán)期限，也就是說1年的未決時間不包括在20年的專利保護(hù)期限內(nèi)，該期限從正規(guī)專利申請遞交之日起算。因此，臨時申請給申請人提供了12個月的專利保護(hù)寬限期，其專利保護(hù)期限實際是21年。而我國《專利法實施細(xì)則》規(guī)定，專利法所稱申請日，有優(yōu)先權(quán)的，指優(yōu)先權(quán)日。我國對專利的20年保護(hù)期是從專利申請日開始計算的，也即從優(yōu)先權(quán)日算起，因此，專利保護(hù)期限是20年。

3　美國臨時專利申請對我們的啟示

3．1　我國制藥企業(yè)應(yīng)積極利用本國優(yōu)先權(quán)制度，強化專利保護(hù)意識

上文已經(jīng)提到國內(nèi)優(yōu)先權(quán)制度能充分保護(hù)申請人的利益，因此企業(yè)應(yīng)該充分利用這一武器，盡早地為自己的研究成果申請專利保護(hù)，防止苦心研究的成果被別人搶占先機，“為他人做嫁衣裳”。

此外，我國的本國優(yōu)先權(quán)制度也有較美國的臨時專利申請制度更為靈活的地方，我國《專利法實施細(xì)則》第三十三條第二款中規(guī)定，申請人要求本國優(yōu)先權(quán)，在先申請是發(fā)明專利申請的，可以就相同主題提出發(fā)明或者實用新型專利申請；在先申請是實用新型專利申請的，可以就相同主題提出實用新型或者發(fā)明專利申請。發(fā)明專利和實用新型各有利弊，申請人可以利用本國優(yōu)先權(quán)更加靈活地選擇對自己更有利的保護(hù)方法[3]。當(dāng)申請人對其發(fā)明創(chuàng)造所具專利性程度把握不準(zhǔn)確時，就可以利用此項規(guī)定將其發(fā)明創(chuàng)造先申請實用新型專利，待技術(shù)成熟后再申請發(fā)明專利；如果申請人先提交了發(fā)明專利申請，卻發(fā)現(xiàn)該技術(shù)可能達(dá)不到發(fā)明專利的水平或者該產(chǎn)品的市場壽命不長，也可以在12個月內(nèi)再遞交實用新型專利申請，而申請日依然是第一次申請的時間。

3．2　我國制藥企業(yè)應(yīng)關(guān)注國外的專利制度

我國《專利法》第二十條規(guī)定，中國申請人要把在國內(nèi)完成的發(fā)明創(chuàng)造向外國申請專利的，必須首先或同時向中國專利局申請專利，使得發(fā)明創(chuàng)造可以首先在我國得到利用。而美國專利法第111(b)(7)款規(guī)定申請人不能利用外國申請為他的臨時申請建立優(yōu)先權(quán)。否則外國申請人享受的是2年的寬限期，而首次提交臨時專利申請的美國發(fā)明人則只有1年，有違國民待遇原則。因此，目前我國申請人申請外國專利只能通過巴黎公約或PCT途徑。但我們完全可以通過關(guān)注美國的臨時專利獲取專利信息，把握專利動態(tài)，間接受益。

3．2．1　關(guān)注“臨時專利”，避免侵權(quán)糾紛

企業(yè)在進(jìn)行新藥研發(fā)時，應(yīng)對藥品或化合物的專利狀況有所了解，避免侵權(quán)糾紛的發(fā)生。我國《藥品注冊管理辦法》第十一條也規(guī)定，藥品注冊的申請人應(yīng)當(dāng)對其申請注冊的藥物或者使用的處方、工藝、用途等，提供申請人或者他人在中國的專利及其權(quán)屬狀態(tài)的說明；他人在中國存在專利的，申請人應(yīng)當(dāng)提交對他人的專利不構(gòu)成侵權(quán)的聲明。由于申請“臨時專利”的諸多優(yōu)點，國外越來越多的企業(yè)或研發(fā)機構(gòu)在“臨時專利”申請的比例也越來越高。因此關(guān)注專利狀況不能不關(guān)注“臨時專利”，一旦發(fā)現(xiàn)本企業(yè)正在研發(fā)的某藥物或化合物已經(jīng)在國外申請了“臨時專利”，企業(yè)在決策時就應(yīng)慎重考慮進(jìn)退問題，以免造成不必要的浪費。

3．2．2　關(guān)注“臨時專利”，獲取信息，促進(jìn)仿創(chuàng)結(jié)合

從我國科研機構(gòu)和制藥企業(yè)的研發(fā)實力來看，目前要脫離仿制，實現(xiàn)完全自主創(chuàng)新是有一定困難的，但在仿制過程中產(chǎn)生創(chuàng)新技術(shù)，即“仿創(chuàng)結(jié)合”則是目前國家提倡的道路。實踐證明，只有在仿制道路上勇于創(chuàng)新的企業(yè)才能在市場競爭中立于不敗之地。企業(yè)通過技術(shù)創(chuàng)新實現(xiàn)經(jīng)濟效益突飛猛進(jìn)的例子屢見不鮮。例如天津藥業(yè)在1992年引進(jìn)地塞米松工藝的基礎(chǔ)上，通過1993年和1997年的先后兩次重大技術(shù)突破，使地塞米松系列產(chǎn)品的成本先后降低了30％和40％，迫使跨國公司于1998年完全退出了壟斷10年的中國市場。該企業(yè)的產(chǎn)品已占國內(nèi)市場的80％，亞洲市場的45％[4]。我國企業(yè)可以通過關(guān)注國外的臨時專利，獲取最新的科研信息，

3．3．3　關(guān)注“臨時專利”，及時把握專利動態(tài)

臨時專利于正規(guī)專利之前提出，更具時效性。關(guān)注臨時專利，可以及時把握專利動態(tài)，根據(jù)情況變化作出反應(yīng)，以免陷入被動。例如2003年4月，當(dāng)非典的陰云剛剛散去的時候，美國疾病控制與預(yù)防中心就申請了一項涉及非典的臨時專利。這無疑對我國是一個巨大的沖擊，針對這一情況，中科院上海生命科學(xué)研究院立即啟動了防治非典新方法和新藥物的研究工作，上海市知識產(chǎn)權(quán)局即布置專利檢索人員收集國內(nèi)外與非典相關(guān)的病因病源、抑制治療、藥物研究等方面的專利文獻(xiàn)，不到10天時間就從“中外專利數(shù)據(jù)庫”中篩選了有關(guān)抗冠狀病毒、病毒抑制、核酸、核酶等方面的上萬篇專利文獻(xiàn)，其中最新的數(shù)據(jù)是2003年4月23日才公開的專利文獻(xiàn)，有效地促進(jìn)了我國在非典領(lǐng)域的研究成果居于世界領(lǐng)先水平。

總之，我國的專利制度要與國際接軌，必然要研究世界各國的專利制度，尤其是國外有所創(chuàng)新的制度，這對我國專利制度的完善有積極的借鑒意義。本文所述的美國臨時專利申請規(guī)定，也希望能對我國的制藥企業(yè)有所啟示。

參考文獻(xiàn)

1　程毓渡。如何把握知識產(chǎn)權(quán)與專利授權(quán)[N]．醫(yī)藥經(jīng)濟報，2005，9，37．